Summary
Det nåværende arbeidet beskriver en eksperimentell protokoll for transøsofageal atrieutbruddspakking for effektiv induksjon av atrieflimmer (AF) hos rotter. Protokollen kan brukes hos rotter med sunne eller ombygde hjerter, slik at studiet av AF patofysiologi, identifisering av nye terapeutiske mål og evaluering av nye terapeutiske strategier.
Abstract
Dyrestudier har gitt viktig innsikt i vår forståelse av atrieflimmer (AF) patofysiologi og terapeutisk ledelse. Reentry, en av hovedmekanismene involvert i AF patogenese, krever en viss masse myokardvev for å kunne oppstå. På grunn av den lille størrelsen på atriene har gnagere lenge vært ansett som "motstandsdyktige" mot AF. Selv om spontan AF har vist seg å forekomme hos rotter, er det nødvendig med langsiktig oppfølging (opptil 50 uker) for at arytmien skal forekomme i disse modellene. Det nåværende arbeidet beskriver en eksperimentell protokoll for transøsofageal atrieutbrudd for rask og effektiv induksjon av AF hos rotter. Protokollen kan med hell brukes hos rotter med sunne eller ombygde hjerter, i nærvær av et bredt spekter av risikofaktorer, slik at studiet av AF patofysiologi, identifisering av nye terapeutiske mål og evaluering av nye profylaktiske og / eller terapeutiske strategier.
Introduction
Atrieflimmer (AF) er den vanligste vedvarende hjertearytmi som oppstår i klinisk praksis, og forekomsten og utbredelsen fortsetter å øke dramatisk over hele verden1. Denne arytmien påvirker opptil 4% av verdens befolkning i henhold til nyere studier2. Men gitt at paroksysmal AF kan være asymptomatisk og derfor kan unnslippe deteksjon, vil den sanne utbredelsen av AF sannsynligvis være mye høyere enn den som presenteres i litteraturen.
Patofysiologien til AF har blitt intenst studert. Likevel forblir de underliggende mekanismene i denne komplekse arytmi ufullstendig belyst, og dette gjenspeiler i de begrensede terapeutiske alternativene, med tvilsom effekt. Dyrestudier har gitt viktig innsikt i vår forståelse av AF patofysiologi og terapeutisk ledelse. Reentry, en av hovedmekanismene involvert i AF patogenese3, krever en viss masse myokardvev for å kunne oppstå. Dermed har store dyr generelt vært foretrukket i AF-studier, mens gnagere på grunn av den lille størrelsen på atriene deres lenge har vært ansett som "motstandsdyktige" mot AF. Bruken av store dyr hindres imidlertid mest ved å håndtere vanskeligheter. I mellomtiden, selv om spontan AF har vist seg å forekomme hos rotter4, er det nødvendig med langsiktig oppfølging (opptil 50 uker) for at arytmien skal forekomme i disse modellene5. Modeller som sikrer rask AF-forekomst hos små gnagere er også utviklet. Oftest bruker disse modellene akutt elektrisk stimulering, ofte i nærvær av andre favoriserende forhold, for eksempel samtidig parasympatisk stimulering eller asfyksi, for å kunstig indusere AF 6,7. Selv om de er effektive, tillater slike modeller ikke evaluering av kritiske AF-relaterte egenskaper, for eksempel de progressive elektriske, strukturelle, autonome eller molekylære ombyggingen av atriene, eller effekten av konvensjonelle eller ikke-konvensjonelle antiarytmiske legemidler på atrie substratet eller på risikoen for ventrikulær pro-arytmi 8,9.
Det nåværende arbeidet beskriver en eksperimentell protokoll for langsiktig transøsofageal atrieutbruddspakking for rask og effektiv induksjon av AF hos rotter. Protokollen er egnet for både akutte og langsiktige studier og kan med hell brukes hos rotter med sunne eller ombygde hjerter, i nærvær av et bredt spekter av risikofaktorer, slik at studiet av AF patofysiologi, identifisering av nye terapeutiske mål og evaluering av nye profylaktiske og / eller terapeutiske strategier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Prosedyrer som involverer dyrefag ble godkjent av Etikkkomiteen ved University of Medicine, Pharmacy, Science and Technology "George Emil Palade" av Târgu Mureș, av den rumenske nasjonale sanitære veterinær- og matsikkerhetsmyndigheten og overholdt International Council for Laboratory Animal Science guidelines (Directive 2010/63/EU).
1. Transøsofageal atrieutbruddsprotokoll
- Randomiser voksne mannlige Wistar rotter (200-400 g kroppsvekt) i to grupper: STIM og SHAM.
- Bedøv dyrene.
- For induksjon, bruk 2,5% isofluran, 4 L / min, 99,5% O2.
- For vedlikehold, bruk en blanding av ketamin/medetomidin (75,0/0,5 mg/kg) administrert intraperitonealt.
- Kontroller dybden på anestesi ved å teste hornhinnen refleks (5% glukoseoppløsning) og nociceptive abstinens refleks (tå klype). Overvåk åndedrettsfrekvensen (et fall på 50% er akseptabelt under anestesi; normal hastighet er mellom 70-120 pust / minutt) og kroppstemperaturen ved hjelp av et rektaltermometer (normal temperatur er mellom 96,5 - 99,5 ° F eller 35,9 - 37,5 ° C).
MERK: Fortsett prosedyren først etter at anestesi er bekreftet. Overvåk dybden av anestesi med jevne mellomrom gjennom hele protokollen. Gjenta intraperitoneal ketamin/medetomidininjeksjon ved behov. - Påfør en oftalmisk salve på begge øynene for å forhindre hornhinneskade.
- Legg dyret i liggende stilling og legg det på en varmepute for å opprettholde kroppstemperaturen ved ~ 37 ° C.
- Fest de tre EKG-elektrodene på overflaten til rottelemmene i en bly II-konfigurasjon (figur 1A).
- Plasser den negative elektroden på høyre forben.
- Plasser den positive elektroden på venstre bakben.
- Plasser jordelektroden på venstre forben.
- Fest elektrodene på plass med tynne elastiske armbåndsstrenger.
- Slå på EKG-registreringen på overflaten og utfør kontinuerlig EKG-opptak gjennom hele prosedyren (figur 1B) ved hjelp av et kommersielt eller lokalt utviklet oppkjøpsprogram10.
- For elektrisk stimulering, bruk et 5-6 F quadripolar kateter koblet til en mikrokontrollerbasert hjerte pacemaker10.
- Når dyret er bedøvet, sett kateteret gjennom munnhulen, inn i spiserøret. Mål avstanden mellom de øvre snittene og hjertet (vurdert ved palpasjon) for å tilnærme dybden som kateteret skal settes inn i spiserøret.
FORSIKTIG: Vær forsiktig så du ikke tvinger kateteret, da det er fare for esophageal perforering. - Bekreft riktig posisjon av stimuleringskateteret på atrinivået som følger.
- Påfør elektrisk stimulering med en frekvens på 400 stimuli/minutt (stimulusvarighet 6 ms).
- Kontroller om EKG-sporingen viser konstant fangst av atriene (dvs. hver elektriske stimulans etterfølges av et smalt QRS-kompleks) (figur 2).
- Bestem den diastoliske terskelen – det vil si den laveste spenningen som kreves for å oppnå atriefangst (vanligvis mellom 10 V og 20 V).
MERK: Utfør følgende for dyrene i STIM-gruppen. - Når kateterets riktige posisjon er bestemt, setter du stimulatoren til en frekvens på 4000 stimuli/minutt (stimulusvarighet 6 ms), ved en spenning 3 V over diastolisk terskel (figur 3).
- Påfør på hvert dyr 15 påfølgende stimuleringssykluser, 20 s hver, med et fritt intervall på 5 minutter mellom syklusene11. Avhengig av studiemålene, gjenta protokollen for hver rotte i 10 dager, med en hastighet på 5 dager / uke, til samme tid på hver dag.
- Kontroller effektiviteten av stimuleringen som følger.
- Identifiser sinusnodegjenopprettingstiden (SNRT), som vises på slutten av den raske tempoet som et tidsintervall som er lengre enn sykluslengden som er registrert under sinusrytmen (figur 4A) og representerer tidsintervallet som kreves for gjenopptakelse av sinusrytme etter overdrivelsesender.
MERK: Overdrive undertrykkelse representerer hemming av sinus node aktivitet ved elektrisk stimulere hjertet med en hastighet høyere enn den iboende rytmen. - Identifiser forekomsten av AF-episoden, som her defineres som tilstedeværelsen av tre eller flere påfølgende uregelmessige, supraventricular beats (dvs. uregelmessig ventrikulær respons med smale QRS-komplekser), med P-bølger fraværende eller erstattet av små, forvrengte "f" bølger (figur 4B).
- Identifiser sinusnodegjenopprettingstiden (SNRT), som vises på slutten av den raske tempoet som et tidsintervall som er lengre enn sykluslengden som er registrert under sinusrytmen (figur 4A) og representerer tidsintervallet som kreves for gjenopptakelse av sinusrytme etter overdrivelsesender.
- Hvis AF-episoden ikke slutter spontant når neste stimuleringssyklus skal utføres (dvs. ved slutten av de fem gratis minuttene mellom syklusene), må du ikke bruke neste stimulering.
- Vent i fem minutter til. Hvis AF-episoden fortsatt fortsetter etter de 10 minutter, avslutt protokollen for den dagen.
MERK: Hvis det ønskes evaluering av alvorlighetsgraden av elektrisk indusert AF, kan lengre EKG-overvåking utføres.
- Vent i fem minutter til. Hvis AF-episoden fortsatt fortsetter etter de 10 minutter, avslutt protokollen for den dagen.
- Hvis alvorlig bradykardi eller asystol oppstår på slutten av stimuleringen (dvs. på grunn av elektrisk stimulering av vagusnerven), avslutt protokollen. Hvis den elektriske aktiviteten ikke går tilbake til normal raskt, utfør ekstern hjertemassasje og administrer atropinsulfat (0,05 mg/kg) intraperitonealt.
- På slutten av prosedyren reverserer anestesi med atipamezol (1 mg/kg) administrert intraperitonealt. Hus rottene individuelt i rene bur med ekstra varme og observere periodisk til de er fullt gjenopprettet. Ingen annen spesifikk dyrepleie er nødvendig på slutten av protokollen.
- Analyser EKG-sporingene på overflaten og finn følgende.
- Inducibility av AF som uttrykkes i prosent (dvs. [antall stimuleringssykluser etterfulgt av AF-episoder / totalt antall stimuleringssykluser brukt] x 100).
- Varigheten av hver AF-episode.
- Tilstedeværelsen av 'vedvarende' (dvs. >10 min) AF-episoder.
MERK: Utfør følgende for dyrene i SHAM-gruppen.
- For rotter i SHAM-gruppen følger du trinn 1.1 til 1.7 som beskrevet ovenfor, uten å bruke elektrisk stimulering.
- Hold kateteret på plass i 80 min (dvs. tiden det tar å fullføre protokollen hos STIM-rotter) uten å bruke elektrisk stimulering, samtidig som overflaten eKG kontinuerlig registreres.
- På slutten av prosedyren, reversere anestesi med atipamezole (1 mg / kg). Ingen annen spesifikk dyrepleie er nødvendig på slutten av protokollen.
- Analyser EKG-sporingene på overflaten og finn parametrene som er beskrevet i trinn 1.16.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I en konseptgodkjenningsstudie ble 22 voksne mannlige Wistar-rotter (200-400 g) tilfeldig tildelt i to grupper: STIM (n = 15) og SHAM (n = 7). Alle dyrene ble plassert individuelt i polykarbonatbur, i et klimakontrollert rom (21-22 °C), med fri tilgang til vann og tørr mat gjennom hele studien. Den transøsofageale stimuleringsprotokollen beskrevet ovenfor ble brukt på alle dyr i 10 dager, 5 dager per uke. Alle dyr gjennomgikk samme protokoll, bortsett fra at rottene i SHAM-gruppen ikke fikk aktiv elektrisk stimulering.
Som forventet ble ingen episoder av AF indusert i SHAM-dyrene gjennom hele protokollen. Derfor kan ingen andre parametere (dvs. varigheten av AF-episoder og tilstedeværelsen av 'vedvarende' AF-episoder) evalueres i denne gruppen.
På den første stimuleringsdagen presenterte 12 (80%) av de 15 STIM-dyrene AF-episoder (Relativ risiko = 3,33, p < 0,001 vs. SHAM-gruppen ved hjelp av Fishers eksakte test). I STIM-rottene, av 164 stimuleringssykluser påført på den første stimuleringsdagen, ble 42 etterfulgt av AF-episoder (median inducibility på 20% [interquartile range of 6.67-72.22] vs. 0% i SHAM-gruppen) (figur 5).
I løpet av de 10 protokolldagene ble AF effektivt indusert hos alle dyr (figur 6). I gjennomsnitt ble 15,6 ± 8,7 episoder av AF indusert i STIM-dyrene under hele protokollens varighet. Av det totale antallet stimuleringssykluser som ble brukt, ble 20,05% etterfulgt av AF, og 41 (17,30%) episoder av AF varte mer enn 600 s. Gjennomsnittlig varighet av AF-episoder som varer mindre enn 600 s er 40,12 s (tabell 1).
Figur 1: Overflate-EKG-opptak. (A) EKG-elektroder posisjonering – to på nivået av forbenene og en på dyrets venstre bakben. (B) Overflate-EKG-sporing registrert før bruk av elektrisk stimulering. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: EKG-sporing som bekrefter fangst av atriene. EKG-sporingen bekrefter kateterets korrekte posisjon, det vil si at et smalt QRS-kompleks observeres etter hver elektriske stimulans med en frekvens på 400 stimuli /minutt. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Mikrokontrollerbaserte innstillinger for hjerte pacemaker. Stimuleringsparametere stilles inn med en frekvens på 4000 stimuli/minutt (ppm: pulser per minutt), stimulusvarighet på 6 ms (WDTh: bredde) og spenning på 11 V (dvs. 3 V over diastolisk terskel). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: EKG-sporinger som bekrefter effektiviteten av stimuleringsprotokollen. (A) Gjenopprettingstiden for sinusnoden (SNRT). Legg merke til at tidsintervallet ved opphør av stimulering (SNRT) er lengre enn sykluslengden som registreres under sinusrytmen (RR-intervall, det vil si intervallet mellom R-bølgene i to påfølgende QRS-komplekser, som representerer varigheten av en hjertesyklus). (B) Utseendet til en atrieflimmerepisode etter ferdigstillelse av atrie-syklusen for elektrisk stimulering. Legg merke til de uregelmessige, smale QRS-kompleksene, fraværet av P-bølger og de små, forvrengte "f" -bølgene. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 5: Inducibility of atrial fibrillation (AF) on the first day of stimulation in the STIM (n = 15) and SHAM (n = 7) groups. Data uttrykkes som median og interkvartilt område. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 6: Gjennomsnittlig daglig inducibility av atrieflimmer i løpet av de 10 dagene av stimuleringsprotokollen i STIM-rottene.
| Elektrisk induserte atrieflimmerepisoder (n = 237) | Tall (%) | Gjennomsnittlig varighet (sekunder) |
| varighet ≥600 sekunder | 41 (17.30%) | - |
| varighet < 600 sekunder | 196 (82.70%) | 40.12 |
Tabell 1: Tidsparametere for elektrisk induserte "vedvarende" og "ikke-vedvarende" atrieflimmerepisoder i STIM-gruppen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det nåværende dokumentet beskriver en eksperimentell protokoll for langsiktig transøsofageal atrieutbruddspakking for rask og effektiv induksjon av AF hos rotter, egnet for både akutte og langsiktige AF-studier. Den 10-dagers stimuleringsprotokollen som er beskrevet her, har blitt brukt til å utvikle en "sekundær spontan AF-modell" (dvs. en modell der AF utvikler seg spontant etter en periode med AF-induksjon ved elektrisk stimulering)10. Varigheten av protokollen kan imidlertid variere avhengig av det nøyaktige formålet med studien.
Andre parametere, for eksempel størrelsen på stimuleringskateteret, kan også justeres, avhengig av størrelsen på dyrene. Det bør imidlertid utvises forsiktighet for å unngå bruk av for store katetre, da de kan forårsake trykk på luftrøret og hindre normal pusting. For rotter på 200-400 g forårsaker 5-6 F katetre ubetydelig trykk på luftrøret og lar protokollen implementeres uten behov for endotrakeal intubasjon.
Et viktig trinn i protokollen er riktig posisjonering av stimuleringskateteret inne i spiserøret, på atrinivået (trinn 1.7). Dette trinnet bør bare utføres etter nøye kontroll av anestesidybden, da mangel på effektiv anestesi øker risikoen for kardio-respiratorisk arrestasjon under følgende trinn i protokollen. Overvåking av hjertets elektriske aktivitet ved hjelp av overflate EKG gir generelt tilstrekkelige data for å bekrefte at kateteret er riktig plassert inne i spiserøret (dvs. stimulering med en frekvens høyere enn den iboende hjertefrekvensen illustrerer overdrive undertrykkelse fenomenet på sinus noden og hver stimulus etterfølges av et smalt QRS-kompleks). Imidlertid kan utføre esophageal elektrokardiogramopptak brukes til å bekrefte riktig posisjon av stimuleringskateteret ytterligere.
Tatt i betraktning den normale baseline hjertefrekvensen til Wistar rotter12, er det viktig å utføre den første stimuleringen med en frekvens høyere enn rottenes egen hjertefrekvens (dvs. >400 stimuli / minutt), for å sikre konstant fangst av atriene (trinn 1.8). I løpet av dette trinnet bør stimuleringsfrekvensen tilpasses hvert dyrs baseline hjertefrekvens. I nærvær av riktig stimuleringshastighet kan mangel på konstant atriefangst skyldes enten feil posisjonering av kateteret eller stimulering ved en spenning under diastolisk terskel (trinn 1.9). Begge scenariene kan føre til ineffektiv stimulering og protokollfeil. Gitt at variasjoner i kroppstemperatur kan fremme hjertearytmier13, bør det gis oppmerksomhet for å opprettholde konstant kroppstemperatur (37 °C) under hele prosedyren.
Teknikken som er beskrevet her, har også en rekke begrensninger. Gitt den anatomiske nærheten til vagusnerven til spiserøret, kan samtidig elektrisk stimulering av vagusnerven oppstå under protokollen, noe som øker risikoen for kardio-respiratorisk arrestasjon. I tillegg bør man huske på at parasympatisk stimulering sannsynligvis også vil bidra til AF-forekomst i denne modellen, og at andre modeller kan være mer tilstrekkelige for studier som tar sikte på å evaluere og / eller manipulere det autonome nervesystemet.
Dyremodeller spiller fortsatt en viktig rolle i å avdekke de patofysiologiske mekanismene som ligger til grunn for AF og i å forbedre terapeutiske strategier. En ideell dyr AF-modell skal være rask og lett å gjenskape, reproduserbar, og bør etterligne så mye som mulig patologien som observeres hos mennesker14. Hos gnagere består de fleste AF-modeller i akutt AF-induksjon, oftest i nærvær av andre favoriserende faktorer, i tillegg til elektrisk stimulering av atria 6,15. Imidlertid kan slike modeller ikke vurdere rollen som progressiv atrieoppussing i AF-patofysiologi, kan ikke teste de langsiktige effektene av ulike antiarytmiske legemidler, og kan ikke vurdere ventrikulær proarrhytmisk risiko forbundet med kronisk antiarytmisk behandling 8,9. I andre studier16 ble en enkelt stimuleringsprotokoll brukt på kronisk ombygd, AF-utsatt atria. Selv om denne strategien overvinner noen av disse ulempene, tar den ikke hensyn til virkningen av AF i seg selv på atrieproarrhytmisk ombygging og på fremtidig AF-forekomst 8,9. I mellomtiden induserer langvarig (f.eks. 10 dager) anvendelse av den transøsofageale atriepaktprotokollen beskrevet ovenfor progressiv atrieproarytmisk ombygging og skaper atriemiljøet som kreves for spontan forekomst av AF, etter at stimuleringsprotokollene er fullført10.
Den eksperimentelle modellen som er beskrevet her, kan derfor effektivt brukes ikke bare til å vurdere akutt AF-induksjon, men også for å lage en modell av (sekundær) spontan AF. Denne modellen gir derfor en rekke store fordeler, og skaper lokalene for en bedre forståelse av mekanismene som er involvert i forekomst og vedlikehold av AF, samt for å identifisere og teste nye terapeutiske strategier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av et stipend fra det rumenske utdannings- og forskningsdepartementet, CNCS - UEFISCDI, prosjektnummer PN-III-P1-1.1-TE-2019-0370, innenfor PNCDI III.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Antisedan (Atipamezole Hydrochloride) 5mg / mL, solution for injection | Orion Corporation | 06043/4004 | for Rats use 1 mg / kg |
| Dormitor (Medetomidine Hydrochloride) 1 mg / mL, solution for injection | Orion Corporation | 06043/4003 | for Rats use 0.5 mg / kg |
| E-Z Anesthesia Single Animal System | E-Z Systems Inc | EZ-SA800 | Allows the manipulation of one animal at a time |
| Isoflurane 99.9%, 100 mL | Rompharm Company | N01AB06 | |
| Ketamine 10%, 25 mL | for Rats use 75 mg / kg | ||
| Microcontroller-based cardiac pacemaker for small animals | Developed in our laboratory (See Reference number 10 in the manuscript) | ||
| Surface ECG recording system | Developed in our laboratory (See Reference number 10 in the manuscript) |
References
- Kornej, J., Börschel, C. S., Benjamin, E. J., Schnabel, R. B. Epidemiology of atrial fibrillation in the 21st century: Novel methods and new insights. Circulation Research. 127 (1), 4-20 (2020).
- Hindricks, G., et al. 2020 ESC Guidelines for the diagnosis and management of atrial fibrillation developed in collaboration with the European Association for Cardio-Thoracic Surgery (EACTS): The Task Force for the diagnosis and management of atrial fibrillation of the European Society of Cardiology (ESC). European Heart Journal. 42 (5), 373 (2021).
- Veenhuyzen, G. D., Simpson, C. S., Abdollah, H. Atrial fibrillation. Canadian Medical Association Journal. 171 (7), 755-760 (2004).
- Lau, D. H., et al. Atrial arrhythmia in ageing spontaneously hypertensive rats: unraveling the substrate in hypertension and ageing. PloS One. 8 (8), 72416 (2013).
- Scridon, A., et al. Unprovoked atrial tachyarrhythmias in aging spontaneously hypertensive rats: The role of the autonomic nervous system. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 303 (3), 386-392 (2012).
- Haugan, K., Lam, H. R., Knudsen, C. B., Petersen, J. S. Atrial fibrillation in rats induced by rapid transesophageal atrial pacing during brief episodes of asphyxia: a new in vivo model. Journal of Cardiovascular Pharmacology. 44 (1), 125-135 (2004).
- Sugiyama, A., Takahara, A., Honsho, S., Nakamura, Y., Hashimoto, K. A simple in vivo atrial fibrillation model of rat induced by transesophageal atrial burst pacing. Journal of Pharmacological Sciences. 98 (3), 315-318 (2005).
- Scridon, A. Dissociation between animal and clinical studies. where do we go wrong. Romanian Journal of Cardiology. 31 (3), 497-500 (2021).
- Mulla, W., et al. Rapid atrial pacing promotes atrial fibrillation substrate in unanesthetized instrumented rats. Frontiers in Physiology. 10, 1218 (2019).
- Scridon, A., et al. Spontaneous atrial fibrillation after long-term transesophageal atrial burst pacing in rats. Technical and procedural approach to a new in vivo atrial fibrillation model. Romanian Journal of Laboratory Medicine. 26 (1), 105-112 (2018).
- Halatiu, V. B., et al. Chronic exposure to high doses of bisphenol A exhibits significant atrial proarrhythmic effects in healthy adult rats. Romanian Journal of Cardiology. 31 (3), 587-595 (2021).
- Zaciragić, A., Nakas-ićindić, E., Hadzović, A., Avdagić, N. Average values of electrocardiograph parameters in healthy, adult Wistar rats. Medical Archives. 58 (5), 268-270 (2004).
- Cheshire, W. P. Thermoregulatory disorders and illness related to heat and cold stress. Autonomic Neuroscience: Basic and Clinical. 196, 91-104 (2016).
- Șerban, R. C., Scridon, A. Data linking diabetes mellitus and atrial fibrillation-how strong is the evidence? From epidemiology and pathophysiology to therapeutic implications. Canadian Journal of Cardiology. 34 (11), 1492-1502 (2018).
- Nishida, K., Michael, G., Dobrev, D., Nattel, S. Animal models for atrial fibrillation: clinical insights and scientific opportunities. Europace. 12 (2), 160-172 (2010).
- Qiu, H., et al. DL-3-n-Butylphthalide reduces atrial fibrillation susceptibility by inhibiting atrial structural remodeling in rats with heart failure. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 391 (3), 323-334 (2018).
