Une injection en deux points établie de manière stable de modèle de démyélinisation focale induite par la lysophosphatidylcholine chez la souris

Résumé

Le présent protocole décrit une injection en deux points de lysophosphatidylcholine via un cadre stéréotaxique pour générer un modèle de démyélinisation stable et reproductible chez la souris.

Résumé

La signalisation des lysophospholipides médiée par les récepteurs contribue à la physiopathologie de diverses maladies neurologiques, en particulier la sclérose en plaques (SEP). La lysophosphatidylcholine (LPC) est un lysophospholipide endogène associé à l’inflammation, et il pourrait induire des dommages rapides avec une toxicité pour les lipides de myéline, conduisant à la démyélinisation focale. Ici, un protocole détaillé est présenté pour l’injection stéréotaxique de LPC en deux points qui pourrait directement provoquer une démyélinisation sévère et reproduire la lésion expérimentale de démyélinisation rapidement et de manière stable chez la souris par une intervention chirurgicale. Ainsi, ce modèle est très pertinent pour les maladies de démyélinisation, en particulier la SEP, et il peut contribuer à l’avancement connexe de la recherche cliniquement pertinente. En outre, l’immunofluorescence et les méthodes de coloration bleue rapide Luxol ont été utilisées pour décrire l’évolution temporelle de la démyélinisation dans le corps calleux de souris injectées avec LPC. En outre, la méthode comportementale a été utilisée pour évaluer la fonction cognitive des souris après modélisation. Dans l’ensemble, l’injection en deux points de lysophosphatidylcholine via un cadre stéréotaxique est une méthode stable et reproductible pour générer un modèle de démyélinisation chez la souris pour une étude plus approfondie.

Introduction

La signalisation des lysophospholipides médiée par les récepteurs implique divers processus physiologiques de presque tous les systèmes d’organes¹. Dans le système nerveux central (SNC), cette signalisation joue un rôle essentiel dans les pathogenies des maladies neurologiques auto-immunes telles que la sclérose en plaques (SEP). La sclérose en plaques est un trouble chronique à médiation immunitaire caractérisé par une démyélinisation pathologique et une réponse inflammatoire, provoquant un dysfonctionnement neurologique et des troubles cognitifs ^2,3. Après une rechute et une rémission....

Protocole

Toutes les procédures animales ont été approuvées par le Comité de l’Institut des soins aux animaux du Tongji Medical College, Université des sciences et de la technologie de Huazhong, en Chine. Des souris mâles et femelles adultes C57BL/6 (type sauvage, WT; 20-25 g; 8-10 semaines) ont été utilisées pour la présente étude. Les souris ont été obtenues à partir de sources commerciales (voir tableau des matériaux). Les souris ont été hébergées dans une installation spécifique exempte d’agents pathogènes (FPS) avec de l’eau et de la nourriture fournies ad libitum. Ils ont été maintenus dans une période alternée de 12 h de cycle clair et sombre da....

Résultats

L’injection en deux points du LPC a entraîné une démyélinisation plus durable
Le LPC entraîne principalement des dommages rapides avec toxicité pour la myéline et clivage de l’intégrité de l’axone¹⁵. Le jour de l’injection était considéré comme le jour 0. Les souris ont été gardées pendant une période de 10 à 28 jours (10 dpi et 28 dpi). La coloration Luxol fast blue (LFB)¹⁰ a été utilisée pour évaluer la zone de démyélinisation chez la souris à ces poin.......

Discussion

La SEP, une maladie démyélinisante chronique du SNC, est l’une des causes les plus fréquentes de dysfonctionnement neurologique chez les jeunes adultes^{de 20 ans}. Cliniquement, environ 60 % à 80 % des patients atteints de SEP connaissent le cycle de rechutes et de rémissions avant de développer une SEP progressive secondaire^21,22, et cela conduit finalement à des troubles cumulatifs du mouvement et des déficits cognitifs au fil du temps

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
L-&alpha ;-Lysophosphatidylcholine du jaune d’oeuf	Sigma-Aldrich	L4129-25MG
Calibre 32 Aiguille	HAMILTON	7762-05
10 &mu ; l seringue	HAMILTON	80014
perceuse crâne à grande vitesse	forte, corée	forte204
perceuse	Hager & Meisinger, Allemagne  ;	REF 500 104 001 001 005
Matrx Animal Aneathesia Ventilator	MIDMARK	VMR
Instrument stéréotaxique portable pour souris	Reward	68507
Micro seringue	Reward	KDS LEGATO 130
Isoflurane  ;	VETEASY
Paraformaldéhyde	Servicebio	G1101
Tampon phosphate	BOSTER	PYG0021
LuxoL fast bLue	Servicebio	G1030-100ML
Suture	FUSUNPHARMA	20152021225
Moule cérébral	Reward	68707
Fixateur	de microscope électroniqueServicebio	G1102-100ML
Rouge neutre (C.I. 50040), pour microscopie Certistain	Sigma-Aldrich	1.01376
Anti-Myéline Protéine Basique Anticorps	Millipore	#AB5864
anti-GST-P pAb	MBL	#311
Ki-67 (SolA15)	Thermo Fisher  ; Scientific	14-5698-95
Anticorps monoclonal à bêta-actine	Proteintech	66009-1-Ig  ;
Protéine polyclonale de myéline Protéine polyclonale	Proteintech	10458-1-AP
OLIG2 Anticorps polyclonaux	Proteintech	13999-1-AP
Alexa Fluor 488  ; AffiniPure  ; Âne anti-Lapin  ; IgG (H+L)	YEASEN	34206ES60
Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L)  ;	YEASEN	34412ES60
Alexa Fluor 594  ; AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)  ;	YEASEN	34212ES60
HRP IgG anti-lapin de chèvre (H+L)	abclonal	AS014
HRP IgG anti-souris de chèvre (H+L)  ;	abclonal	AS003
Adulte C57BL/6 souris mâles et femelles	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd

Anticorps monoclonal