コロニー形成ユニット(CFUs):フライボディから細菌を定量化する

- まず、開発の望ましい段階でハエを収集し、滅菌チューブに配置します。 内部微生物叢のみを数えるために、ハエの外側を70%エタノールに浸して殺菌する。内部微生物叢と外部微生物叢の両方を測定するには、この滅菌ステップをスキップする。

培養できる細菌を含む均質な混合物が必要です。液体細菌培地を使用してホモゲネートの体積を持ち出し、ホモジュネートの連続希釈を行い、細菌に適した固体成長培地でこれらの希釈液の一定量をプレートします。

プロトコル例では、生殖不能ハエをグノトバイオティクスまたは定義された細菌培養物で接種し、CFUsを収集して測定します。

- フィルターチップを使用して一晩の成長の100マイクロリットルを無菌マイクロフュージチューブに移します。

OD600を取得した後、ピペットチップで上澄み液を取り除き、新鮮なmMRSを使用してペレットを再中断します。希釈された細菌株を同じ比率で混ぜてマルチ種のカクテルを作り出します。

コロニー形成ユニットまたはCFUsを測定するには、5つのハエを125マイクロリットルのセラミックビーズと125マイクロリットルのmMRSスープを含む1.7ミリリットルマイクロフュージチューブに移します。 ティッシュホモジナイザーを使ってハエを均質化する。次に、875マイクロリットルのmMRSでホモゲネートを希釈し、ホモゲネートを5秒間ボルテックスし、ピペット120マイクロリットルをミクロタイタープレートの最初のウェルに入れる。

1番目のウェルから10マイクロリットルを取り出し、MRSの70マイクロリットルを含む第2ウェルに加えます。その後、2番目の井戸からMRSの70マイクロリットルを含む第3の井戸に10マイクロリットルを移し、徹底的に混ぜます。 100個の孤立したコロニーに最後に、フライ当たりCFUを計算します。