Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Om Drosophila-larven voor te bereiden op een hittesondetest, verzamelt u dieren van het gewenste ontwikkelingsstadium en zet u enkele larven over op een testplaat met een dunne film water. Het water laat de larven vrij bewegen zonder aan het plaatoppervlak te blijven plakken.
Drosophila-larven detecteren schadelijke thermische stimuli via multidendritische sensorische neuronen in hun epidermis, bekend als nociceptoren. Deze vuren pas als een bepaalde sensorische drempel is bereikt, zoals potentieel schadelijke hoge temperaturen.
Stel de warmtesonde in op een temperatuur die deze sensorische drempel zal overwinnen en de nociceptoren zal laten vuren. Druk voorzichtig de punt van de sonde tegen de larve om warmte toe te passen. De larve zal reageren op de schadelijke temperatuur met thermo-nociceptief gedrag en zich terugtrekken uit de sonde. Stop wanneer de larve een rol van 360 graden vertoont, weg van de hittesonde, of wanneer een gedefinieerde tijd is verstreken. Noteer de reactietijd.
In het voorbeeldprotocol zien we een demonstratie van een gelokaliseerde hittesondetest op vroege derde instar Drosophila-larven.
- Stel eerst de temperatuur van de thermische sonde in op het gewenste instelpunt. Gebruik een penseel of tang om een individuele larve voorzichtig over te brengen op een vlak platform, zodat de lava wordt bedekt met een dunne laag water.
- Om de variatie in druk te minimaliseren en om de juiste locatie en hoek van de warmtesonde te garanderen, is de praktijk perfect.
- Druk de sondepunt voorzichtig tegen de larve in segment A4 en oefen lichte druk uit met de punt onder een hoek van ongeveer 45 graden tussen de sonde en het oppervlak van de larve. De druk moet een lichte inkeping op het oppervlak van de larve veroorzaken en zal meestal voldoende zijn om voortbeweging te voorkomen. Blijf de larve stimuleren totdat een terugtrekkingsreactie wordt weergegeven of totdat de 20 seconden cutoff is bereikt.
Reagerende larven vertonen meestal eerst een voorlopig gedrag van het opheffen van het hoofd en de staart, gevolgd door het terugtrekkingsgedrag van het rollen van ten minste 360 graden. Zodra het terugtrekkingsgedrag is gestart, laat u contact met de sonde los en registreert u de latentie of tijd die nodig is om zich terug te trekken. Als er binnen 20 seconden geen terugtrekkingsgedrag wordt waargenomen, is de larve een niet-responder.
