Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- צג פעילות Drosophila, או DAM, מחזיק צינורות פעילות מרוכזים מצוידים במזון זבוב בקצה אחד ו אוויר חדיר קרוב יותר בקצה השני. התקנה זו מכילה זבובים בודדים במהלך ניסויים שנמשכים מספר ימים או אפילו שבועות.
מניחים את הסכר בסביבה מבוקרת כמו אינקובטור עם טמפרטורה מוגדרת, לחות ומחזור אור.
כדי לתעד פעילות לוקומוטורית, חבר את המנגנון למערכת מחשב המאחסנת את הקריאות מגלאי ה- DAM. האלקטרוניקה של DAM מזהה ללא הרף את תקינות קרן האינפרא-אדום הנפלטת דרך נקודת האמצע של כל צינור ומעלה נתונים מעת לעת למערכת המחשב.
כאשר הזבוב הולך הלוך ושוב בתוך הצינור, הוא חוצה את קרן האינפרא אדום.
בפרוטוקול הבא, נשתמש במערכת DAM כדי לחקור מקצבים צירקדיים אצל זכרים בוגרים של דרוזופילה.
- לפני טעינת זבובים לצינורות פעילות, הפעילו את האינקובטורים שישמשו לאכלס את צגי הפעילות.
לאחר מכן, הרדים את הזבובים עם פחמן דו חמצני. לאחר מכן, באמצעות מברשת צבע עדינה, להעביר בעדינות זבוב אחד לתוך צינור פעילות.
שמור את הצינור מונח על צידו עד הזבוב מתעורר כדי למנוע את הזבוב להידבק למזון.
לבסוף, לשים את צגי הפעילות לתוך האינקובטורים ולחבר אותם למערכת איסוף הנתונים באמצעות חוטי הטלפון.
כעת, לאחר שהזבובים הועמסו לתוך צינורות הפעילות ומערכת ניטור הפעילות של לוקומוטור מוכנה, ניתן כעת לרשום את הנתונים.
לחקר השעון הביולוגי ביחס לפרוטוקול זה, הזמן שבו האורות נדלקים באינקובטור מוגדר כזמן צייטגבר 0 וכל הזמנים האחרים הם יחסיים לערך זה. בתנאי LD סטנדרטיים 12:12, סוג פראי Drosophila melanogaster בדרך כלל להפגין שני התקפי פעילות; אחד מרוכז סביב ZT0, המכונה שיא בוקר, ועוד סביב ZT12, המכונה שיא ערב.
מקצבי פעילות לוקומוטורים חופשיים נמדדים בתנאים כהים וטמפרטורה קבועים לאחר תקופת הכניסה.
באופן כללי, גודל מדגם של לפחות 16 זבובים יש צורך להשיג תקופות הפעלה חופשית אמינה עבור גנוטיפ מסוים.
הנתונים הבינאריים הגולמיים מעובדים באמצעות DAM Filescan102X ומסוכמים לפחים של 15 ו-30 דקות בעת ניתוח פרמטרים צירקדיים, או סלים של דקה עד חמש דקות בעת ניתוח פרמטרי שינה/מנוחה.
