Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- لفهم الظروف التي واجهتها والاستجابة لها وفقا لذلك ، فإن دودة C. elegans لديها ، من بين أمور أخرى ، نظام كيموسينزوري متطور للغاية قادر على اكتشاف مجموعة واسعة من المواد الكيميائية المختلفة.
الخلايا العصبية الحسية في الرأس، والخلايا العصبية الأمفية والداخلية labial، فضلا عن الخلايا العصبية في الذيل، والخلايا العصبية phasmid، تتعرض إما بشكل مباشر أو غير مباشر من خلال لطيف للظروف الخارجية.
لاختبار الاستجابة الكيميائية إما للروائح المتطايرة أو الإشارات القابلة للذوبان في الماء ، وعزل الديدان في مرحلة النمو المطلوبة وتعريضها للمواد الكيميائية الاختبارية على ساحة تجريبية تم إعدادها مسبقا.
على العكس من ذلك ، عندما تتعرض لمواد كيميائية أقل ملاءمة أو سامة مثل المعادن الثقيلة ، تعرض الدودة chemotaxis سلبية ، وتجنب المادة الكيميائية.
في بروتوكول المثال، سنرى عرضا توضيحيا لإختبار التاكسى الكيميائي، يختبر نفور الدودة من النحاس.
- بعد الحضانة بين عشية وضحاها، وإزالة لوحات من الحاضنة واستخدام الجانب السفلي ملحوظ من لوحة كدليل، ماصة 100 ميكرولتر من النحاس الضرس أعدت حديثا 0.5 اثنين من محلول كبريتات على حافة أجار لإنشاء حاجز النحاس الخارجي.
تأكد من أن النحاس اثنين من محلول الكبريتات لا يتصل التصحيح البكتيري، والسماح للمحلول النحاس لتجف على لوحة. تحقق من جفاف كل خمس دقائق بعد نقلها مع الأنسجة المختبرية عن طريق dabbing طفيفة الحل بالقرب من حافة لوحة لتمييز.
قبل الفحص مباشرة، نقل الكائنات الحية التجريبية إلى لوحة أجار خالية من البكتيريا والسماح للديدان الخيطية للتحرك بحرية لمدة دقيقة واحدة لإزالة البكتيريا الزائدة.
بعد ذلك ، ماصة 1 ملليلتر من M9 على لوحة مع الشباب البالغين التي تم نقلها قبل 24 ساعة من أجل غسل الديدان في أنبوب الطرد المركزي الدقيق.
يجب أن تشكل الديدان بيليه في الجزء السفلي من الأنبوب.
إذا تم نقل البكتيريا الزائدة في البداية مع الديدان، كرر ما مجموعه خمس مرات. بعد الغسيل النهائي، يستنشق العملاق حتى 100 ميكرولتر من محلول M9 وتبقى بيليه الدودة.
Pipette 20 ميكرولتر من بيليه دودة من الجزء السفلي من الأنبوب على النصف خالية من البكتيريا من لوحة المقايسة.
إزالة محلول M9 الزائد من الديدان الخيطية باستخدام نسيج مختبري في غضون دقيقة واحدة. تأكد من عدم اتصال محلول M9 بمحلول كبريتات النحاس اثنين، وأن تظل الديدان وسطح أجار سليمة.
بمجرد إزالة محلول M9 وبدء جميع الديدان في الأنماط الحركية غير السائلة ، أي عندما تتوقف عن السحق ، ابدأ ساعة توقيت الفحص.
تحقق من لوحات المقايسة كل 30 دقيقة.
