FITC-デキストラン摂食:C.エレガンスにおける腸透過性を定量化する方法

- C.エレガンスは、病気を引き起こす腸病原体による感染の実験モデルとして使用され、部分的には腸の障壁を破壊し、その透過性を高める。

次に、これらのワームを、蛍光タグ付きの高分子量多糖物FITC-dextranと混合した熱死死大腸菌で構成される標識食品を備えた寒天プレートに置きます。

ワームが標識された細菌を食べることを許す。無傷の腸の障壁を持つものは急速に食物を取り除き、より透過性の腸を持つワームでは、蛍光マーカーが器官の内腔を越えて浸透する。

動物を固定するためにホルムアルデヒド溶液にワームを移す。1~2分後、ホルムアルデヒドを取り付け培地に交換してください。

最後に、蛍光顕微鏡によるワームの画像化C. elegans腸顆粒は自己蛍光であるため、バックグラウンドシグナルが存在します。

このプロトコル例では、病原性シュードモナス菌に感染したワームの腸透過性に対する生体分子DIMによる治療の効果をアッセイする。

- 2ミリリットルの熱不活性化Eを混合してFITCデキストラン補充プレートを準備します。 4ミリグラムのFITC-dextranを含む大腸菌は、20個の新鮮なNGM寒天プレートのそれぞれに100マイクロリットルの混合物を加え、清潔なラボベンチで1時間乾燥させます。

翌日、Sバッファでワームを洗い、新鮮なNGM寒天プレートで1時間這うようにします。黒い96ウェルの平底プレートのウェルに4%ホルムアルデヒドの50マイクロリットルを加え、約50個のワームを各ウェルに移します。

- ホルムアルデヒドは有毒な化学物質であり、注意して取り扱う必要があります。