A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
- 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
- 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
- 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
- 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
- 10:16Conclusion
אנו מציגים פרוטוקול עבור ההערכה התפקודית של ספריות mutagenesis רווי אתר יחיד המקיפות של חלבוני ניצול רצף תפוקה גבוהה. חשוב לציין, גישה זו משתמשת זוגות פריימר מאונכים לבצע ריבוב בניית רצף ספרייה. תוצאות נציג באמצעות TEM-1 β-lactamase שנבחר במינון רלוונטי קליני של אמפיצילין מסופקות.
