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Ingegneria fluorescenza 'D'oro' per incorporazione di pressione selettiva di aminoacidi Non canonico e l'analisi della proteina di fluorescenza e di spettrometria di massa
JoVE Journal
Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
Engineering ‘Golden’ Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence
DOI:

11:51 min

April 27, 2018

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:46Recombinant Protein Expression
  • 04:05Target Protein Purification via Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography
  • 05:20Intact Protein Mass Analysis by High-performance Liquid Chromatography Coupled to Electrospray Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry
  • 06:38Fluorescence Lifetime Measurements and Decay-associated Spectra of GdFP
  • 07:59Results: Gold Fluorescent Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence
  • 10:13Conclusion

Summary

Automatic Translation

Biologia sintetica consente l'ingegneria delle proteine con proprietà senza precedenti tramite l'inserimento co-translational di aminoacidi non canonico. Qui, abbiamo presentato come una variante spettralmente rosso-spostato di un fluoroforo GFP-tipo con proprietà spettroscopiche di fluorescenza romanzo, chiamato proteina fluorescente "oro" (GdFP), viene prodotto in e. coli tramite incorporazione di pressione selettiva (SPI).

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