Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Sæd samling av differensial kvalitet bruker tetthet gradert sentrifugering
Chapters
Summary November 29th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
I dette papiret, vi tar sikte på å beskrive tetthet gradert sentrifugering teknikken og dens anvendelse i sperm fysiologi forskning.
Transcript
Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål innen sperm fysiologi, for eksempel de kjemiske determinater av sædkvalitet. Den største fordelen med denne teknikken er at den er evnen til å skille store mengder utvalg etter kvalitet, samt tilpasningsevne sammenlignet med alternative metoder. Selv om denne metoden kan gi innsikt i forskjellene i sperm kvalitet, Det kan også brukes på andre prøver som blandede celletyper eller subcellulære komponenter med forskjellige tettheter.
Til å begynne, lage to 3 milliliter Percoll fortynninger i to separate rør. I et rent testrør, fortynne 1 milliliter sædprøve med 2 milliliter PBS. Rør den forsiktig for å blande løsningen.
Tilsett 3 milliliter av den nedre tettheten Percoll sollution til et sterilt konisk rør. Deretter, nøye pipette 3 milliliter av høyere tetthet Percoll løsning under lavere tetthet Percoll løsning. Mens du vipper konisk rør i en 45 graders vinkel, pipette 3 milliliter av fortynnet sæd prøven på toppen av Percoll tetthet gradient.
Etter å ha forberedt et tomt rør, sentrifuger begge rørene ved 1500 Gs i 20 minutter. Forsikre deg om at tre forskjellige lag sæd har dannet seg i karet etter sentrifugering. Ved hjelp av en pipette samle de tre lagene av sæd, starter med det øverste laget, etterfulgt av det midterste laget, og slutter med den harde pellet nederst på røret.
Overfør hvert av lagene til et sterilt mikrosentrigerrør. Fortynn hver av sædprøvene med 1,5 milliliter PBS og sentrifuge prøvene ved 1500 Gs i ti minutter. Til slutt, hell av supernatant og rekonstituer pellets med motilitetbuffer.
I denne protokollen ble Percoll tetthetsgradient sentrifugeringsteknikken, eller PDGC, brukt til å skille en sædprøve i tre forskjellige lag. Sperm skiller seg inn i et lag av høy kvalitet under den høyere tetthetsløsningen, et middels kvalitetslag mellom de høyere og lavere tetthetsløsningene, og et lag av lav kvalitet over løsningen med lavere tetthet. Disse forskjellene i sperm kvalitet er dokumentert av forskjeller i levedyktighet, mobilitet, og penetrerbarhet.
Mens du prøver denne prosedyren, er det viktig å huske at prøver må bringes til romtemperatur. Suksessen til PDGC er avhengig av nøye fremstilling av gradienten, samt forsiktig innsamling av de isolerte lagene. Etter utviklingen banet denne teknikken vei for vår forskning innen spermperdiomikk for å utforske biomarkører for fruktbarhet i fuglearter.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
