Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Коллекция спермы дифференциальной качества с использованием градиентного центрифугирования плотность
Chapters
Summary November 29th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
В этой статье мы стремимся описывают производительность метода градиентного центрифугирования плотность и его применение в исследованиях физиологии спермы.
Transcript
Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области физиологии спермы, такие как химические детерминаты качества спермы. Основным преимуществом этой техники является возможность разделить большое количество выборки по качеству, а также приспособляемости по сравнению с альтернативными методами. Хотя этот метод может обеспечить понимание различий в качестве спермы, он также может быть применен к другим образцам, таким как смешанные типы клеток или субклеточных компонентов с различной плотностью.
Для начала сделайте два 3 миллилитровых разбавления Percoll в двух отдельных трубках. В чистой пробирке разбавьте 1 миллилитр образца спермы с 2 миллилитров PBS. Труба его осторожно смешать раствор.
Добавьте 3 миллилитров нижней плотности солла в стерильную коническую трубку. Затем тщательно пипетки 3 миллилитров раствора Percoll более высокой плотности под раствором Percoll более низкой плотности. При наклоне конической трубки под углом 45 градусов, пипетка 3 миллилитров разбавленной спермы образца на вершине градиента плотности Percoll.
После подготовки пустой трубки, центрифуга обе трубки на 1500 Gs в течение 20 минут. Убедитесь, что три различных слоя спермы образовались в ванне после центрифугации. С помощью пипетки собрать три слоя спермы, начиная с верхнего слоя, а затем средний слой, и заканчивая твердой гранулы в нижней части трубки.
Перенесите каждый из слоев в стерильную микро центрифугу. Разбавить каждый из образцов спермы с 1,5 миллилитров PBS и центрифуги образцов на 1500 Gs в течение десяти минут. Наконец, слить супернатант и воссоздать гранулы с подвижности буфера.
В этом протоколе метод центрифугации плотности Percoll, или PDGC, был использован для того чтобы отделить образец semen в 3 определенных слоя. Сперма разделяется на высококачественный слой ниже раствора более высокой плотности, слой среднего качества между решениями более высокой и низкой плотности и слой низкого качества выше раствора более низкой плотности. Об этих различиях в качестве спермы свидетельствуют различия в жизнеспособности, подвижности и прояснености.
При попытке этой процедуры, важно помнить, что образцы должны быть доведены до комнатной температуры. Успех PDGC зависит от тщательной подготовки градиента, а также тщательного сбора изолированных слоев. После его развития, этот метод проложил путь для наших исследований в области периомии спермы для изучения био маркеров плодородия у птичьих видов.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
