Коллекция спермы дифференциальной качества с использованием градиентного центрифугирования плотность

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области физиологии спермы, такие как химические детерминаты качества спермы. Основным преимуществом этой техники является возможность разделить большое количество выборки по качеству, а также приспособляемости по сравнению с альтернативными методами. Хотя этот метод может обеспечить понимание различий в качестве спермы, он также может быть применен к другим образцам, таким как смешанные типы клеток или субклеточных компонентов с различной плотностью.

Для начала сделайте два 3 миллилитровых разбавления Percoll в двух отдельных трубках. В чистой пробирке разбавьте 1 миллилитр образца спермы с 2 миллилитров PBS. Труба его осторожно смешать раствор.

Добавьте 3 миллилитров нижней плотности солла в стерильную коническую трубку. Затем тщательно пипетки 3 миллилитров раствора Percoll более высокой плотности под раствором Percoll более низкой плотности. При наклоне конической трубки под углом 45 градусов, пипетка 3 миллилитров разбавленной спермы образца на вершине градиента плотности Percoll.

После подготовки пустой трубки, центрифуга обе трубки на 1500 Gs в течение 20 минут. Убедитесь, что три различных слоя спермы образовались в ванне после центрифугации. С помощью пипетки собрать три слоя спермы, начиная с верхнего слоя, а затем средний слой, и заканчивая твердой гранулы в нижней части трубки.

Перенесите каждый из слоев в стерильную микро центрифугу. Разбавить каждый из образцов спермы с 1,5 миллилитров PBS и центрифуги образцов на 1500 Gs в течение десяти минут. Наконец, слить супернатант и воссоздать гранулы с подвижности буфера.

В этом протоколе метод центрифугации плотности Percoll, или PDGC, был использован для того чтобы отделить образец semen в 3 определенных слоя. Сперма разделяется на высококачественный слой ниже раствора более высокой плотности, слой среднего качества между решениями более высокой и низкой плотности и слой низкого качества выше раствора более низкой плотности. Об этих различиях в качестве спермы свидетельствуют различия в жизнеспособности, подвижности и прояснености.

При попытке этой процедуры, важно помнить, что образцы должны быть доведены до комнатной температуры. Успех PDGC зависит от тщательной подготовки градиента, а также тщательного сбора изолированных слоев. После его развития, этот метод проложил путь для наших исследований в области периомии спермы для изучения био маркеров плодородия у птичьих видов.