Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
جمع الحيوانات المنوية فرق الجودة باستخدام الكثافة المتدرجة الطرد المركزي
Chapters
Summary November 29th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
في هذه الورقة، ونحن نهدف إلى وصف أداء تقنية الطرد المركزي التدرج الكثافة وتطبيقه في بحوث فسيولوجيا الحيوانات المنوية.
Transcript
يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال فسيولوجيا الحيوانات المنوية، مثل محددات المواد الكيميائية لجودة الحيوانات المنوية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي قدرتها على فصل كميات كبيرة من العينة حسب الجودة ، وكذلك القدرة على التكيف عند مقارنتها بالطرق البديلة. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في الاختلافات في نوعية الحيوانات المنوية، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على عينات أخرى مثل أنواع الخلايا المختلطة أو المكونات دون الخلية مع كثافات مختلفة.
للبدء، وجعل اثنين من 3 ملليلتر بيركوليتر dilutions في أنبوبين منفصلين. في أنبوب اختبار نظيف ، تمييع 1 ملليلتر من عينة السائل المنوي مع 2 ملليلتر من PBS. الأنابيب بلطف لخلط الحل.
إضافة 3 ملليلتر من انخفاض كثافة Percoll sollution إلى أنبوب مخروطي معقم. ثم، دقيق ماصة 3 ملليلتر من حل Percoll الكثافة أعلى تحت أقل كثافة حل Percoll. في حين إمالة أنبوب مخروطي في زاوية 45 درجة، ماص 3 ملليلتر من عينة من السائل المنوي المخفف على رأس التدرج كثافة Percoll.
بعد إعداد أنبوب فارغ، الطرد المركزي كلا الأنابيب في 1500 Gs لمدة 20 دقيقة. ضمان أن ثلاث طبقات متميزة من السائل المنوي قد شكلت في الحوض بعد الطرد المركزي. باستخدام ماصة جمع الطبقات الثلاث من السائل المنوي، بدءا من الطبقة العليا، تليها الطبقة الوسطى، وتنتهي مع بيليه الثابت في الجزء السفلي من الأنبوب.
نقل كل من الطبقات إلى أنبوب جهاز طرد مركزي صغير معقمة. تخفيف كل عينة من عينات السائل المنوي مع 1.5 ملليلتر من برنامج تلفزيوني والطرد المركزي العينات في 1500 Gs لمدة عشر دقائق. وأخيرا، صب قبالة فائقة وإعادة تشكيل الكريات مع العازلة حركية.
في هذا البروتوكول، تم استخدام تقنية الطارد المركزي للتدرج في كثافة Percoll، أو PDGC، لفصل عينة السائل المنوي إلى ثلاث طبقات متميزة. يتم فصل الحيوانات المنوية إلى طبقة عالية الجودة تحت محلول الكثافة الأعلى، وطبقة متوسطة الجودة بين حلول الكثافة الأعلى وأدنى، وطبقة منخفضة الجودة أعلى من محلول الكثافة المنخفض. ويتضح من هذه الاختلافات في نوعية الحيوانات المنوية من الاختلافات في القدرة على البقاء، والتنقل، وpenetrability.
أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن العينات تحتاج إلى إحضارها إلى درجة حرارة الغرفة. يعتمد نجاح PDGC على إعداد دقيق للتدرج وكذلك جمع دقيق للطبقات المعزولة. بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق لأبحاثنا في مجال الحيوانات المنوية لاستكشاف العلامات الحيوية للخصوبة في أنواع الطيور.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
