Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Sperm yoğunluğu degrade Santrifüjü kullanarak fark kalitesini topluluğu
Chapters
Summary November 29th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Bu yazıda, yoğunluk gradient Santrifüjü tekniği ve sperm Fizyoloji araştırma kendi uygulamasında performansını açıklayan hedefliyoruz.
Transcript
Bu yöntem sperm fizyolojisi alanında anahtar soruların cevapyardımcı olabilir, sperm kalitesinin kimyasal belirleyicisi gibi. Bu tekniğin en büyük avantajı, büyük miktarlardanumuneyi kaliteye göre ayırmanın yanı sıra alternatif yöntemlere kıyasla adaptasyon yeteneğidir. Bu yöntem sperm kalitesindeki farklılıklara ışık taksa da, farklı yoğunluklara sahip karışık hücre tipleri veya hücre altı bileşenler gibi diğer örneklere de uygulanabilir.
Başlamak için, iki ayrı tüpler iki 3 mililitre Percoll seyreltme olun. Temiz bir test tüpünde, 2 mililitre PBS ile 1 mililitre meni numunesini seyreltin. Çözeltiyi karıştırmak için hafifçe borulayın.
Steril konik bir tüp için düşük yoğunluklu Percoll sollution 3 mililitre ekleyin. Daha sonra, düşük yoğunluklu Percoll çözeltisi altında yüksek yoğunluklu Percoll çözeltisi dikkatle 3 mililitre. Konik tüpü 45 derecelik bir açıyla yatırırken, pipet 3 mililitre seyreltilmiş meni örneğinin Percoll yoğunluk degradesinin üzerine.
Boş bir tüp hazırladıktan sonra, 1500 Gs'de her iki tüpü de 20 dakika santrifüj edin. Santrifüj sonrası küvette üç farklı meni tabakasının oluştuğundan emin olun. Bir pipet kullanarak meni üç tabaka toplamak, üst tabaka ile başlayan, orta tabaka takip, ve tüpün altındaki sert pelet ile biten.
Katmanların her birini steril bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Meni örneklerinin her birini 1,5 mililitre PBS ile seyreltin ve numuneleri 1500 Gs'de on dakika santrifüj edin. Son olarak, supernatant dökün ve motilite tampon ile pelet yeniden.
Bu protokolde, Percoll yoğunluk gradyan santrifüj tekniği veya PDGC, bir meni örneğini üç ayrı katmana ayırmak için kullanılmıştır. Sperm, yüksek yoğunluklu çözeltinin altında yüksek kaliteli bir tabaka, yüksek ve düşük yoğunluklu çözeltiler arasında orta kalitede bir tabaka ve düşük yoğunluklu çözeltinin üzerinde düşük kaliteli bir tabaka olarak ayrılır. Sperm kalitesindeki bu farklılıklar canlılık, hareketlilik ve penetrite farklılıkları ile kanıtlanmaktadır.
Bu yordamı denerken, numunelerin oda sıcaklığına getirilmesi gerektiğini unutmamak gerekir. PDGC'nin başarısı, yalıtılmış katmanların dikkatli bir şekilde toplanmasının yanı sıra degradenin dikkatli hazırlanmasına bağlıdır. Bu teknik, geliştirildikten sonra, kuş türlerinde doğurganlığın biyo belirteçlerini araştırmak için sperm perdiomics alanındaki araştırmalarımızın önünü açtı.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
