Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Spermier samling av differentiell kvalitet med hjälp av täthet lutning centrifugering
Chapters
Summary November 29th, 2018
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
I detta papper, vi strävar efter att beskriva utförandet av täthet lutning centrifugering tekniken och dess tillämpning i spermier fysiologi forskning.
Transcript
Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor inom området spermier fysiologi, såsom den kemiska determinates av spermier kvalitet. Den största fördelen med denna teknik är att det är förmågan att separera stora mängder prov efter kvalitet, samt anpassningsförmåga jämfört med alternativa metoder. Även om denna metod kan ge insikt i skillnaderna i spermiekvalitet, kan den också tillämpas på andra prover såsom blandade celltyper eller subcellulära komponenter med olika tätheter.
Till att börja med gör två 3 milliliter Percoll utspädningar i två separata rör. I ett rent provrör späds 1 milliliter spermaprov med 2 milliliter PBS. Rör den försiktigt för att blanda lösningen.
Tillsätt 3 milliliter av den lägre densiteten Percoll sollution till ett sterilt koniskt rör. Därefter försiktigt pipettera 3 milliliter av den högre densiteten Percoll lösning under den lägre densiteten Percoll lösning. Medan du lutar det koniska röret i 45 graders vinkel, pipetter 3 milliliter av det utspädda spermaprovet ovanpå Percoll densitet gradient.
Efter att ha förberett ett tomt rör, centrifug båda rören vid 1500 Gs i 20 minuter. Försäkra att tre distinkta lager av sperma har bildats i badkaret efter centrifugeringen. Med hjälp av en pipett samla de tre skikten av sperma, börjar med det översta lagret, följt av det mellersta lagret, och slutar med den hårda pelleten i botten av röret.
Överför vart och ett av skikten till ett sterilt mikrocentrifugrör. Späd vart och ett av spermaproverna med 1,5 milliliter PBS och centrifugerna proverna vid 1500 Gs i tio minuter. Slutligen häll av supernatanten och rekonstruera pellets med motilitetsbuffert.
I detta protokoll användes Percoll densitet gradient centrifugation teknik, eller PDGC, för att separera ett spermaprov i tre distinkta lager. Spermier separerar till ett skikt av hög kvalitet under den högre densitetslösningen, ett lager av medelhög kvalitet mellan de högre och lägre densitetslösningarna och ett lågkvalitetsskikt ovanför lösningen med lägre densitet. Dessa skillnader i spermiekvalitet framgår av skillnader i lönsamhet, rörlighet, och penenerbarhet.
Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att prover måste bringas till rumstemperatur. Framgången för PDGC är beroende av noggrann förberedelse av gradienten samt noggrann insamling av de isolerade skikten. Efter dets utveckling banade denna teknik vägen för vår forskning inom spermieperdiomik för att utforska bio markörer för fertilitet hos fågelarter.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
