Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Ein murines Modell der Dengue-Virus-induzierten akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Krankheit
Chapters
Summary April 28th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Hier stellen wir ein Protokoll zur Schaffung eines immunkompetenten ICR (Institute of Cancer Research) murinen Modells der Infektion des zentralen Nervensystems vor, um die Entwicklung der Neuropathie anzuzeigen. Die Überwachung akuter viraler Enzephalit-Erkrankungen durch identische Krankheitswerte könnte durchgeführt werden, um die dengue-Virus-induzierte Neuropathie in vivo zu zeigen.
Transcript
Dieses Protokoll eines Krankheitsmodells sehen Sie Dengue-Virus-Infektion im Gehirn zu einer In-vivo-Plattform für das Screening viraler und Wirtsvektoren im Zusammenhang mit Neuropathogenese. Im Gegensatz zu früheren Modellen verwenden unsere Modelle Werkzeuge der Infektion mit einem niedrigen viralen Titer, um das immunkompetente Institut für Krebsforschung Zusäugen von Mäusen für enzephalitische Krankheitsprokreation zu infizieren. Das Verfahren wird Ting-Jing Shen demonstrieren, ein Doktorand aus meinem Labor.
Vor Beginn des Infektionsverfahrens, verdünnen Nicht-angepassten Dengue-Virus zwei Vorrat, zu einem mal 10 bis die fünfte Plaque bildende Einheiten pro 40 Mikroliter der RPMI 1640 mittlere Konzentration. Als nächstes laden Sie eine 0,3 Milliliter Spritze mit einer 30-Spur-Nadel mit 10 Mikroliter verdünntem Virus. Und eine 0,3-Milliliter-Spritze mit einer 30-Meter-Nadel, mit 30 Mikroliter Virus pro Tier.
Für die Intercerebral-Lieferung des Virus, drücken Sie das Orakel zwischen Daumen und Zeigefinger, um sanft eine sieben Tage alte Säugetier-Institut für Krebsforschung Maus in einer anfälligen Position zurückhalten und injizieren die 10 Mikroliter Volumen des verdünnten Virus in den Lambda-Bereich, an der Kreuzung der sagittalen und Lambdoid Naht. Nach der Intercerebral-Injektion, verwenden Sie den Daumen und Zeigefinger, um die Maus in einer Supine-Position zu halten, und sanft intraperitoneally, injizieren Sie das 30-Mikroliter-Volumen des verdünnten Virus, in den murinen Abdomen. Für die Bewertung des Krankheitsverlaufs weisen Sie jeder geimpften Maus täglich eine Punktzahl von Null bis fünf zu, je nach Grad der akuten viralen Enzephalitis-ähnlichen Erkrankungen, und zeichnen Sie die Werte für jeden Tag als kurvenbasierte Figur, wobei Sie den Mittelwert plus und minus die Standardabweichung der täglichen Testergebnisse in jeder Gruppe verwenden.
Verglichen mit den Körpergewichtsänderungen, die bei verspotteten, mittelgeimpften Mäusen gemessen wurden, weisen geimpfte Tiere mit Dengue-Virus zu jedem Zeitpunkt während der Studie eine Abnahme des Körpergewichts auf. Darüber hinaus zeigen Dengue-Virus-infizierte Tiere eine signifikante Zunahme von Buckelrückenhaltungen, limbischen Krampfanfällen, limbischer Schwäche, Lähmung und Tod im Vergleich zu den Symptomen, die von verspotteten geimpften Tieren gezeigt werden. Tatsächlich weisen Dengue-infizierte Mäuse eine zeitabhängige Reduktion der Überlebensraten auf, die bei verspotteten geimpften Tieren nicht beobachtet wird, was die Etablierung eines infektiösen Modells des Dengue-Virus innerhalb des zentralen Nervensystems bestätigt, das das Fortschreiten akuter viraler Enzephalitis-ähnlicher Krankheiten bei Mäusen demonstriert.
Die Punktion der falschen Stelle kann zu einer Nadelblockade durch den Score und zum Überlauf der Viruslösung außerhalb des Kopfes führen, was zu einer fehlgeschlagenen Injektion und einer fehlgeschlagenen Infektion führt. Im Anschluss an das Verfahren können Hirnproben für pathologische Schäden, Immunzellinfiltration und Virusreplikationsanalyse durch Hämatoxylin und Eosin-Färbung Flusszytometrie und Plaque-Formationstest geerntet werden. Unser immunkompetentes murinisches Modell bietet eine Plattform für die Erforschung der pathogenen Mechanismen der Dengue-Virus-Infektion, für die Entwicklung von Dengue-Virus-Impfstoffen oder Anti-Dengue-Virus-Medikamente.
Das Dengue-Virus ist ein Erreger der Biosicherheitsstufe zwei, und als solcher sollten alle Experimente mit diesem Virus in einem qualifizierten Labor der Biosicherheitsstufe zwei abgeschlossen werden.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
