Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En murine model af dengue virus-induceret akut viral encephalitis-lignende sygdom
Chapters
Summary April 28th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Her præsenterer vi en protokol for at skabe en immun kompetent ICR (Institute of Cancer Research) murine model af centralnervesystemet infektion for at vise udviklingen af neuropati. Overvågning af akutte virale encephalitiske lidelser ved identiske sygdoms scorer kan udføres for at vise denguevirus-induceret neuropati in vivo.
Transcript
Denne protokol af en sygdom model, du ser dengue virus infektion i hjernen bliver en in vivo platform for screening virale og vært vektorer forbundet med neuropatogenese. I modsætning til tidligere modeller, bruger vores modeller værktøjer af infektionen med en lav viral titer, at inficere immunkompetente Institute of Cancer Research diende mus for encephalitic-lignende sygdom forplantning induktion. Demonstration af proceduren vil være Ting-Jing Shen, en ph.d.-kandidat fra mit laboratorium.
Før infektionsproceduren indledes, fortyndes den ikke-tilpassede denguevirus to bestand, til en gange 10 til den femte plaque danner enheder pr 40 mikroliter af RPMI 1640 medium koncentration. Dernæst indlæses en 0,3 milliliter sprøjte udstyret med en 30 gauge nål med 10 mikroliter fortyndet virus. Og en 0,3 milliliter sprøjte udstyret med en 30 gauge nål, med 30 mikroliter virus per dyr.
For intercerebral levering af virus, skal du trykke på oraklet mellem tommel-og pegefinger til forsigtigt at begrænse en syv dage gammel diende Institute of Cancer Research mus i en udsat position og injicere de 10 mikroliter volumen af fortyndet virus i lambda området, i skæringspunktet mellem sagittal og lambdoid sutur. Efter intercerebral injektion, bruge tommelfingeren og pegefingeren til at holde musen i en liggende position, og forsigtigt intraperitoneally, injicere 30 mikroliter volumen af fortyndet virus, i murine maven. Ved scoring af sygdomsprogressionen tildeles en score på nul til fem til hver podet mus dagligt i henhold til kvaliteten af akutte virale encephalitislignende sygdomme, og scorerne for hver dag som en kurvebaseret figur ved hjælp af middelværdi plus og minus standardafvigelsen for de daglige testresultater i hver gruppe.
Sammenlignet med kropsvægtændringerne målt i mock, medium kun podede mus udviser denguevirusinokulerede dyr et fald i kropsvægt på hvert tidspunkt under forsøget. Desuden viser denguevirusintrede dyr en betydelig stigning i pukkelryggede rygstillinger, limbiske anfald, limbisk svaghed, lammelse og død sammenlignet med de symptomer, der vises af mock podede dyr. Faktisk udviser denguefeberinficerede mus en tidsafhængig reduktion i overlevelsesraten, som ikke observeres hos mock inokulerede dyr, hvilket bekræfter etableringen af en smitsom model af denguevirus i centralnervesystemet, der viser udviklingen af akutte virale encephalitislignende sygdomme hos mus.
Punktering af det forkerte sted kan resultere i nåleblokering ved score og overløb af virusopløsningen uden for hovedet, hvilket resulterer i mislykket injektion og en mislykket infektion. Efter proceduren, hjerneprøver kan høstes for patologiske skader, immuncelle infiltration, og viral replikation analyse af hæmatoxylin og eosin farvning flow cytometri, og plaque dannelse assay, henholdsvis. Vores immunkompetente murine model, giver en platform for at udforske de patogene mekanismer dengue virus infektion, for udvikling af dengue virus vacciner, eller anti-dengue virus narkotika.
Denguevirus er et biosikkerhedsniveau 2-patogen, og som sådan bør alle forsøg med denne virus afsluttes i et kvalificeret laboratorium på det beskyttede dyrs område 2.
Related Videos
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
Login to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To request a trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
