Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En murin modell av Dengue virus-inducerad akut viral encefalit-liknande sjukdom
Chapters
Summary April 28th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Här presenterar vi ett protokoll för att skapa en immunkompetenta ICR (Institute of cancer Research) murin modell av centralanervsystemet infektion för att visa utvecklingen av neuropati. Övervakning av akuta virala encefalitiska störningar med identiska sjukdoms Poäng kan utföras för att Visa denguevirusinducerad neuropati in vivo.
Transcript
Detta protokoll av en sjukdom modell du se denguefeber virusinfektion i hjärnan blir en in vivo plattform för screening viral och värd vektorer som är associerade med neuropathogenesis. Till skillnad från tidigare modeller, våra modeller använder verktyg för infektionen med en låg viral titer, att infektera immunkompetenta Institute of Cancer Research ammande möss för encephalitic-liknande sjukdom fortplantning induktion. Demonstrera förfarandet kommer att Ting-Jing Shen, en doktorand från mitt laboratorium.
Innan du inleder infektionsproceduren, späd icke-anpassade denguevirus två lager, till en en gånger 10 till den femte plack bildar enheter per 40 mikroliter av RPMI 1640 medelhög koncentration. Därefter laddar en 0,3 milliliter spruta utrustad med en 30 gauge nål med 10 mikroliter av utspädda virus. Och en 0,3 milliliter spruta utrustad med en 30 gauge nål, med 30 mikroliter virus per djur.
För intercerebral leverans av viruset, tryck på oraklet mellan tummen och pekfingret för att försiktigt hålla tillbaka en sju dagar gammal a suckling Institute of Cancer Research mus i en benägen position och injicera 10 mikroliter volym utspädd virus i lambda området, i skärningspunkten mellan sagittal och lambdoid sutur. Efter intercerebral injektion, använd tummen och pekfingret för att hålla musen i en ryggläge, och försiktigt intraperitoneally, injicera 30 microliter volym utspädd virus, i murin buken. För scoring av sjukdomen progression, tilldela en värdering av noll till fem till varje inokulerad mus dagligen, enligt betyget av akut viral encefalit-liknande sjukdomar, och rita poängen för varje dag som en kurva baserad figur, med hjälp av medelvärdet plus och minus standardavvikelsen för de dagliga testresultaten i varje grupp.
Jämfört med kroppsvikten förändringar mätt i mock, medium endast inokulerade möss, denguevirus inokulerade djur uppvisar en minskning av kroppsvikten vid varje tidpunkt under rättegången. Dessutom, denguevirus infekterade djur visar en betydande ökning av hunch tillbaka ställningar, limbiska anfall, limbiska svaghet, förlamning, och död jämfört med de symtom som visas av håna inokulerade djur. Faktum är att denguefeber infekterade möss uppvisar en tidsberoende minskning av överlevnaden som inte observeras i håna inokulerade djur, bekräftar inrättandet av en smittsam modell av denguevirus i det centrala nervsystemet som visar utvecklingen av akut viral encefalit-liknande sjukdomar hos möss.
Punktering av fel plats kan resultera i nålblockering av poängen och viruslösningens överströmning utanför huvudet, vilket resulterar i misslyckad injektion och en misslyckad infektion. Efter ingreppet, hjärnprover kan skördas för patologiska skador, immun cell infiltration, och viral replikation analys av hematoxylin och eosin färgning flödescytometri, och plack bildas analysen, respektive. Vår immunkompetenta murine modell, ger en plattform för att utforska de patogena mekanismerna för denguevirusinfektion, för utveckling av denguevirus vacciner, eller anti-denguevirus läkemedel.
Denguevirus är en biosäkerhet nivå två patogen, och, som sådan, alla experiment med detta virus bör slutföras i en kvalificerad djur biosäkerhet nivå två laboratorium.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
