Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Моделирование инсульта у мышей: очаговые поражения коры при фототромбозе
Chapters
Summary May 6th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Здесь описана модель фототромботического инсульта, где инсульт производится через неповрежденный череп путем индуцирования постоянной микрососудистой окклюзии с использованием лазерного освещения после введения светочувствительного красителя.
Transcript
Подход к моделированию инсульта фототромбоза может подходить для клеточных и молекулярных исследований кортикальной пластичности из-за ограниченных границ и гибкости для индуцирования травмы в различных областях коры. Три принципиальных преимущества отличают модель фототромбоза от других моделей инсульта: возможность направить поражение в нужную область, его высокая воспроизводимость и низкая смертность. Правильное дозирование бенгальской розы имеет решающее значение для успеха и стабильности модели.
Результаты зависят от технических характеристик, таких как мощность лазера, время перекрестного применения и оптический шиллинг незатронутой коры. Начинают с растворения бенгальской розы в 0,9% физиологическом растворе для конечной концентрации 10 миллиграмм на миллилитр. Тщательно стерилизуйте все инструменты с помощью горячего свинцового стерилизатора и дезинфицируйте все поверхности до и после операции с помощью микробного дезинфицирующего спрея.
Подготовьте шприц, наполненный физиологическим раствором, чтобы сохранить область операции гидратированной, и подготовьте анестезионный газ. Измерьте массу тела мыши, чтобы скорректировать дозу бенгальской розы, которую нужно вводить. Установите связанную с обратной связью управляемую грелку для поддержания температуры тела мыши.
После того, как мышь будет полностью обезболена и зафиксирована в стереотаксической рамке, осторожно вставьте ректальный зонд, чтобы контролировать температуру тела мыши на протяжении всей хирургической процедуры. Нанесите глазную мазь Dex panthenol на оба глаза и очистите кожу и окружающий мех дезинфицирующим средством. Используйте ножницы, чтобы сделать один продольный разрез длиной от двух до двух с половиной сантиметров и втянуть, чтобы обнажить череп.
Используйте вату, чтобы аккуратно удалить позузу и найти корональные швы. Наденьте защитные очки при включении 561-нанометрового лазера и отметьте плюс три миллиметра влево, затем выключите лазер и зацепите наклейку с отверстием диаметром четыре миллиметра в отмеченных координатах. Вводят мыши внутрипарименную розу бенгальскую.
Поместите лазерный луч на расстояние от четырех до пяти сантиметров от черепа. Включите лазер и осветите череп в течение 20 минут. Регидратировать череп, применяя две капли 0,9% физиологического раствора.
После наложения швов на рану поместите мышь в восстановительную камеру при 37 градусах Цельсия, чтобы восстановиться после анестезии. Через час поместите мышь обратно в клетку в комнату с контролируемой температурой. Кристаллическое фиолетовое пятно для последовательных корональных участков мозга использовалось для анализа входа в объем инфаркта после 24 часов индукции инсульта.
Изменчивость этой модели инсульта была низкой, а средний объем инфаркта составлял 29,3 кубических миллиметра, что составляет 23% одного полушария мозга. Поражение фототромбоза вызвало умеренное и долгосрочное сенсорно-моторное нарушение, обозначенное композитной нейробаллойтом. У животных, перенесших инсульт, произошло значительное изменение нейробиологических показателей через 24 часа после операции.
Несмотря на то, что различия сохранялись, мышей с инсультом со временем улучшались. У мышей, подвергаемых розовой бенгальской плюс освещению, масса тела и температура тела снизились через 24 часа после операции. Однако в течение трех дней после операции наблюдалось восстановление.
Ишемические изменения были подтверждены с помощью лазерной визуализации. Результаты показали, что роза бенгальская или лазерное освещение сами по себе не вызывали поражения, в то время как одновременное применение обоих генерировало круглую гипоперфузированную область, окруженную узкой олигомерной зоной. Кристаллическое фиолетовое и туннельное окрашивание для оценки объема инфаркта через 24 часа после операции не выявило повреждения тканей ни при операции розовой бенгалии, ни при операциях лазерного освещения.
С другой стороны, роза бенгальская плюс лазерное освещение генерировали хорошо разграниченное поражение. Важно измерить массу тела животного, чтобы скорректировать инъекцию бенгальской розы. Правильное состояние коронерных переключателей важно для того, чтобы вызвать постоянное поражение между животными.
Поскольку этот протокол оставляет череп нетронутым и может даже выполняться через краниальные окна, его можно комбинировать с широкоугольной или многофотонной визуализацией in vivo.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
