Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Modellering Slagtilfælde i mus: Focal Cortical Læsioner af photothrombosis
Chapters
Summary May 6th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Beskrevet her er den fotothrombotiske slagtilfælde model, hvor et slagtilfælde er produceret gennem intakt kraniet ved at fremkalde permanent mikrovaskulær okklusion ved hjælp af laser belysning efter administration af en lysfølsom farvestof.
Transcript
Den fotothrombose slagtilfælde model tilgang kan ved egnet til cellulære og molekylære undersøgelser af kortikal plasticitet på grund af de begrænsede grænser og fleksibilitet til at fremkalde skade i forskellige områder af cortex. Tre principfordele adskiller fotothrombosemodellen fra andre slagtilfældemodeller, muligheden for at dirigere læsionen til den ønskede region, den er høj reproducerbarhed og lav dødelighed. Korrekt rose bengal dosering er afgørende for succes og for stabiliteten af modellen.
Resultaterne afhænger af tekniske specifikationer som laserkraft, cross application timing og optisk shilling af den upåvirkede cortex. Begynd med opløsning steg bengalen i 0,9%saltvandsopløsning for en endelig koncentration på 10 milligram pr. milliliter. Steriliser omhyggeligt alle instrumenter ved hjælp af en varm blysterilisator og desinficer alle overflader før og efter operationen med en mikrobiel desinfektionsmiddelspray.
Forbered en sprøjte fyldt med saltvandsopløsning for at opretholde operationsområdet hydreret og forberede anæstesigassen. Mål musens kropsvægt for at justere den dosis rosebengal, der skal injiceres. Indstil den tilhørende feedbackstyrede varmepude for at opretholde musens kropstemperatur.
Når musen er helt bedøvet og fastgjort i den stereotaktiske ramme, skal du forsigtigt indsætte rektalsonden for at overvåge musens kropstemperatur under hele det kirurgiske indgreb. Påfør Dex panthenol øjensenget på begge øjne og rengør huden og den omgivende pels med desinfektionsmiddel. Brug en saks til at lave et enkelt to til to og en halv centimeter langsgående snit og træk tilbage for at udsætte kraniet.
Brug bomuld til forsigtigt at fjerne periosteum og finde korona suturer. Brug beskyttelsesbriller, mens du tænder for 561 nanometerlaseren, og marker plus tre millimeter til venstre, sluk derefter for laseren og krog klistermærket med fire millimeter diameterhul i de markerede koordinater. Injicere musen intraparietal med rose bengal.
Placer laserstrålen i en afstand af fire til fem centimeter fra kraniet. Tænd for laseren og belys kraniet i 20 minutter. Rehydrer kraniet ved at anvende to dråber på 0,9%saltvand.
Efter suturering af såret skal du placere musen i et genopretningskammer ved 37 grader Celsius for at komme sig efter anæstesi. Efter en time skal du placere musen tilbage i buret i et temperaturstyret rum. Den krystalviolet plet til serielle koronar hjernesektioner blev brugt til infarkt volumenindgangsanalysen efter 24 timer efter slagtilfældeinduktionen.
Variationen af denne slagtilfælde model var lav, og den gennemsnitlige infarkt volumen var 29,3 kubikmillimeter, der repræsenterer 23% af den ene hjerne halvkugle. Fototromboselæsionen forårsagede en moderat og langsigtet sensorisk motorisk svækkelse angivet af den sammensatte neuroscore. Slagtilfælde dyr havde en betydelig ændring i neuro score 24 timer efter operationen.
Selvom forskellene fortsatte, blev slagtilfældemusene bedre med tiden. I mus udsat for rosengalen plus belysning faldt kropsvægten og kropstemperaturen 24 timer efter operationen. Men inden for tre dage efter operationen blev genopretningen observeret.
Iskæmiske ændringer blev bekræftet ved hjælp af laser imaging. Resultaterne viste, at rosengalen eller laserbelysningen alene ikke gav en læsion, mens den samtidige anvendelse af begge genererede et rundt hypoperfunderet område omgivet af den smalle oligomeriske zone. Krystalviolet og tunnelfarvningen til vurdering af infarktvolumen 24 timer efter operationen afslørede ingen vævsskader hverken i rosengalen eller laserbelysningsoperationerne.
På den anden side genererede rosengalen plus laserbelysning en godt afgrænset læsion. Det er vigtigt at måle dyrets kropsvægt for at justere den rosengalske injektion. Den korrekte tilstand af retsmediciner skiftere er vigtigt at fremkalde en konsekvent læsion mellem dyr.
Da denne protokol efterlader kraniet intakt og kan endda udføres gennem kranievinduer, kan det kombineres med bred felt eller multi photon in vivo billeddannelse.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
