Medicine
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
הדמיה מיוצבת של אורך ב-Vivo ברמה התאית של הלבלב במודל מורין עם חלון הדמיה תוך-וינטלית של הלבלב
Chapters
Summary May 6th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
In vivo הדמיה ברזולוציה גבוהה של הלבלב היה קל עם חלון הדמיה תוך וינטלית הלבלב.
Transcript
פרוטוקול זה מתאר רמה תאית מייצבת וחוזרת על הנשימה בהדמיית ויוו של הלבלב עם חלון הדמיה תוך-וינטלית חדשנית בלבלב. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לבצע הדמיה תלת ממדית ללא תנועה עם רזולוציה עד לרמה התאית במשך שלושה שבועות בלבלב של עכבר חי. התחל על ידי הכנת הפלטפורמה הכירורגית וחיטוי המשטחים עם 70%אתנול.
לאחר נשימה, השתמש בבדיקה רקטלית עם כרית חימום הנשלטת על ידי הומיאותרמיה כדי לפקח על טמפרטורת הגוף. הסר שיער מהאגף השמאלי של העכבר ולהחיל אלכוהול ויוד לחלופין, מסתובב מאתר החתכים אל המשטח החיצוני, לעולם לא חוזר לאתר החתירה, ומסתיים ביוד. לאחר מכן, לעשות 1.5 ס"מ חתכוך על האגף השמאלי של העכבר, לנתח את העור ואת השריר.
השתמש בתבל שחור או ניילון 4-0 כדי לבצע תיל מחרוזת ארנק בשולי החתיכה. משוך את הטחול בזהירות עם מלקחיים טבעת ולזהות את הלבלב. הצבת החלון על אגף העכבר, להעביר את הטחול ואת הלבלב דרך המרחב הפתוח של החלון.
לאחר מכן, הניחו בעדינות את הלבלב על צלחת חלון ההדמיה תוך הנחת הטחול על המרחב הפתוח של החלון. הזריקו פאנק-1 נוקליט אדום ישירות לתוך הלבלב. השתמש מחט קטטר 31-מד כדי להחיל טיפות של דבק ציאנואקרילט n-Butyl לשולי חלון ההדמיה, הבטחת כמות מינימלית של דבק מוחל.
יש למרוח בעדינות זכוכית כיסוי עגולה 12 מ"מ על שולי חלון ההדמיה. לאחר מכן, החזק את לולאת התפר כך שתתאים לחריץ לרוחב של החלון וקשור אותו שלוש פעמים. לבסוף, כדי למנוע את ההפרעה של תפרים הדוקים אלה כאשר העכברים ערים, לחתוך את האתר הפרוקסימלי המרבי של העניבה.
התחל על ידי הפעלת המיקרוסקופ התוך-וינטלי, כולל כוח הלייזר. כדי להכניס קטטר וסקולרי, להפעיל לחץ על הצד הפרוקסימלי של הזנב עם האינדקס והאצבע השלישית. במידת הצורך לחמם את הזנב עם מנורה.
לחטא את וריד הזנב עם תרסיס אתנול 70%, ולאחר מכן להכניס קטטר 30-מד לתוך הווריד זנב לרוחב לדמיין את regurgitation של דם בצינור PE-10. יש למרוח סרט משי על הקטטר כדי לייצב אותו. הזרקת FITC dextran ו- TMR dextran, או בדיקות פלואורסצנטיות אחרות בהתאם לצורך, על פי השילוב של בדיקות פלואורסצנטיות.
הכנס בדיקה רקטלית כדי לשלוט באופן אוטומטי בטמפרטורת הגוף באמצעות מערכת כרית חימום הומיאותרמית. לאחר מכן, הכנס את חלון הדמיית הלבלב שהוכן במהלך ההתקנה של מיקרוסקופיה תוך-וינטלית למחזיק החלון. העבר את העכבר מהפלטפורמה הכירורגית לשלב ההדמיה.
כדי לבצע הדמיה תוך-ויאלית, התחל בהדמיית הלבלב בהגדלה נמוכה, כגון ארבע פעמים, כדי לסרוק את כל התצוגה של הלבלב בחלון הדמיית הלבלב. לאחר קביעת אזור העניין, עבור לעדשת יעד הגדלה גבוהה יותר, כמו 20 פעמים או 40 פעמים, כדי לבצע הדמיה ברמה התאית ברזולוציה רוחבית וצירית כ-0.5 מיקרומטר ו-3 מיקרומטרים בהתאמה. בצע הדמיה של Z-stack או זמן-לשגות כדי לבחון את המבנה התלת-ממדי או את הדינמיקה ברמה התאית, כגון העברת תאים.
מיקרוסקופיה תוך-וינטלית בשילוב עם חלון ההדמיה התוך-וינטלי של הלבלב מספקת יציבות רקמות לטווח ארוך המאפשרת רכישת הדמיה ברזולוציה גבוהה למעקב אחר איים בודדים למשך עד שלושה שבועות. החלון מושתל בעכבר C57 שחור 6 N עם נוגדן נגד CD31 מוזרק תוך ורידי, מצומד עם פלואורופור Alexa 647, הקל על הדמיה רחבת היקף והדמיה תלת-ממדית מוגדלת של הלבלב. תאי Acinar זוהו בתמונות הממוצעות של רקמת הלבלב בכלי vasculature הסמוך, הדמו באמצעות autofluorescence ו נוגדן אנטי CD31 בהתאמה.
באמצעות שיטת הדמיית הפסיפס, המשלבת תצוגה רחבת שדה עם הדמיה ברזולוציה גבוהה, כ-40 עד 50 איונים עם כלי ההשמדה הסמוך הוצגו באופן חזותי בעכבר MIP-GFP. מחקר קודם הראה כי איונים ניתן לעקוב עד שלושה שבועות באמצעות שיטת הדמיה יציבה זו. כדי לדמיין תאים סרטניים, תאים אדומים נוקליט PANC-1 הושתלו ישירות לתוך לבלב העכבר במהלך הניתוח וכלי הדם הסמוכים היו מוכתמים עם אנטי CD31 מצומד עם Alexa 647.
באמצעות פרוטוקול זה, נוצרו תמונות רחבות של סרטן הלבלב. זה עזר לשייט את השוליים של הגידול, כמו גם להשיג תמונות 3D ברזולוציה גבוהה ברמת התא הבודד. השלב הקריטי ביותר בשיטה זו הוא ההשתלה המיומנת של חלון הדמיית הלבלב בעכבר.
באמצעות שילובים אחרים של תאי עכבר פלואורסצנטיים, ובדיקות נוגדנים, ניתן לזהות אינטראקציה דינמית של תאים סמוכים עם איונים או תאים לבטל. שיטה זו יכולה להיות מיושמת באופן נרחב על ידי אלה החוקרים את השינוי של האי בתנאים פתופיזיולוגיים שונים וסביבות מיקרו של סרטן הלבלב במקום.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
