Immunology and Infection
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Drosophila melanogaster Larve injeksjon protokoll
Chapters
Summary October 19th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Drosophila melanogaster voksne fluer har blitt mye brukt som modellorganismer for å undersøke de molekylære mekanismene som ligger til grunn for antimikrobielle medfødte immunresponser og mikrobielle infeksjonsstrategier. For å fremme D. melanogaster larvestadiet som et ekstra eller alternativt modellsystem, beskrives en larval injeksjonsteknikk.
Transcript
Denne protokollen tar for seg vanskelighetene og utfordringene med mikroinjektiv larve ved å beskrive en presis metode som gjør det mulig å bruke Drosophila melanogaster larve som modell for ulike immun- og molekylære studier. Dette er en enkel injeksjonsteknikk som presenterer en effektiv, kostnadseffektiv og rask metode for gjentatte ganger å levere en rekke stoffer på en jevn måte, noe som gir konsistente og pålitelige resultater. Begynn med å velge tredje instar stage larver og vask dem med Ringers løsning i en liten Petri-tallerken.
Legg et filterpapir i en Petri-tallerken og fukt det med 5 ml Ringers oppløsning. Plasser deretter larver på filterpapiret. Forbered kapillærer ved hjelp av 3,5"glass kapillærrør i en mikropipettetrekker.
Åpne glasskapillæren ved hjelp av rette serrated medium point tang. Fyll den åpne kapillæren med mineralolje ved hjelp av en engangssprøyte av plast. Deretter kaster du oljen ut av kapillærrøret med en nanoliterinjektor.
Fyll kapillæren med ønsket bakteriepreparering for injeksjon. Overfør de bedøvede larver til et filterpapir fuktet med Ringers løsning. Bruk tang, bruk fast trykk på dorsalsiden av larvens bakre ende, hvor trakeal spirakler er tydelige.
Sett deretter nålen horisontalt, mot larvens bakre ende, og injiser bakteriebestandene. Fjern tang for å unngå søl av hemolymfe eller tarm. Trekk deretter nålen som tidligere er satt inn i larver.
Infiser 20 larver for hver eksperimentell tilstand. Bruk en pensel, overfør forsiktig de injiserte larver til et eget fuktig filterpapir. Tilsett Ringers løsning etter behov for å forhindre uttørking.
Inkuber Petri-retten i en inkubator ved 25 C.Drosophila melanogaster larver smittet med Photorhabdus asymbiotica viste en overlevelsesrate på 57% i 24 timer etter injeksjon, mens larve injisert med Escherichia coli viste en overlevelsesrate på 85%samtidig. Betydningen av denne metoden er at nålen holdes omtrent parallelt med larven. Trykket som brukes til å holde larven er svært lite, noe som reduserer muligheten for hemolymfelekkasje, dødelig skade eller utilstrekkelig levering av ønsket stoff.
Denne teknikken kan perfeksjoneres med øvelse.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
