माउस तंत्रिका स्टेम सेल व्यापारियों की संस्कृति

Biology

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Summary

यह वीडियो भ्रूण चूहों के विकास प्रांतस्था से neuroprecursors के अलगाव के लिए इस्तेमाल किया विधि का वर्णन करता है. गर्भाशय से भ्रूण को हटाने, cortical ऊतक विदारक, और प्रमस्तिष्क प्रांतस्था पृथक पचाने की प्रक्रिया से पता चला है.

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Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors. J. Vis. Exp. (2), e152, doi:10.3791/152 (2007).

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Abstract

प्राथमिक तंत्रिका स्टेम सेल संस्कृतियों केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के विकास के अंतर्निहित तंत्र के अध्ययन के लिए उपयोगी होते हैं. स्टेम सेल अनुसंधान तंत्रिका तंत्र की हमारी समझ को बढ़ाने के लिए और हमें वर्तमान में असाध्य मस्तिष्क रोगों और चोटों के लिए उपचार विकसित करने के लिए अनुमति दे सकता है. इसके अलावा, स्टेम कोशिकाओं तंत्रिका भेदभाव और transdifferentiation और आनुवांशिक और पर्यावरणीय संकेतों के तंत्र के विस्तृत अध्ययन के उद्देश्य से स्टेम सेल अनुसंधान के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए कि विशेष प्रकार की कोशिकाओं में कोशिकाओं के प्रत्यक्ष विशेषज्ञता. यह वीडियो एक भ्रूण दिन 12.5 माउस पृष्ठीय अग्रमस्तिष्क कोशिकाओं से disaggregate करने के लिए प्रयोग किया जाता तकनीक को दर्शाता है. विच्छेदन प्रक्रिया गर्भाशय से E12.5 माउस भ्रूण संचयन, ठीक विदारक संदंश के साथ "त्वचा" को हटाने और अंत में प्रमस्तिष्क प्रांतस्था के टुकड़े अलग भी शामिल है. विच्छेदन के बाद, ऊतक और पचा यंत्रवत् अलग. resuspended dissociated कोशिकाओं तो "स्टेम सेल" मीडिया है कि तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के विकास के पक्ष में सुसंस्कृत हैं.

Protocol

  1. माउस तंत्रिका व्यापारियों (NPCs) E12.5 भ्रूण प्रांतस्था से अलग थे.
  2. त्वचा और mesenchymal परतों dissected telencephalic vesicles से हटा दिया गया.
  3. Vesicles और 0.05% trypsin में 0.02% EDTA और 20 मिनट के लिए HBSS में 0.2% BSA 37 डिग्री सेल्सियस के साथ incubated रहे थे
  4. Trypsinization 1 सोयाबीन मिलीग्राम / मिलीलीटर trypsin अवरोध करनेवाला के एक बराबर मात्रा HBSS में (# सिग्मा T6522) द्वारा बंद कर दिया गया था.
  5. ऊतक dissociated थे आग पॉलिश पाश्चर pipettes के साथ trituration के कई दौर का उपयोग हज़म.
  6. कक्ष एक बार HBSS में 0.2% BSA के साथ धोया गया और 20 एनजी / मिलीलीटर EGF, 10 एनजी / एमएल FGF2 (और आर डी सिस्टम या Peprotech), और 2 / स्नातकीय मिलीलीटर हेपरिन के साथ मीडिया में +५०००० laminin-लेपित coverslips पर / कोशिकाओं मिलीलीटर पर मढ़वाया ( सिग्मा).

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Discussion

सीएनएस विकास और स्टेम कोशिका जीव विज्ञान की हमारी समझ में महान प्रगति हमारे फसल, अलग संस्कृति और भ्रूण तंत्रिका स्टेम सेल की क्षमता द्वारा ही संभव बनाया गया है. इस वीडियो E12.5 माउस प्रमस्तिष्क प्रांतस्था और बाद में और भ्रूण तंत्रिका स्टेम सेल के disaggregation संवर्धन के विच्छेदन को दर्शाता है. कई अन्य इसी तरह के तरीकों को सफलतापूर्वक किया गया है अन्य जांचकर्ताओं द्वारा नियोजित है.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Straight Iris Scissors Tool Fine Science Tools 14060-11
Medium Scissors Tool Fine Science Tools 15024-10
Micro Scissors Tool Fine Science Tools 15002-08
Bent Forceps Tool Fine Science Tools 11251-35

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132, (15), 3549-3559 (2005).
  2. Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).

Comments

3 Comments

  1. There are lots of mistakes about working in a steril conditions, the cap of the bottles should be plased upsode down.  No good lab practoce !

    Reply
    Posted by: Maryam M.
    April 20, 2009 - 2:31 PM
  2. Thanks, but no contamination in 6 years.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 20, 2009 - 4:34 PM
  3. I think it would be better to say "Culture of Mouse neural Stem (precursor) cells". You can not use both stem and precursor terms together.

    Reply
    Posted by: Hassan A.
    July 13, 2010 - 9:25 PM

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