마우스 신경 줄기 세포 엽 성의 전구 물질의 문화

Biology

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Summary

이 동영상은 배아 생쥐의 개발​​ 피질에서 neuroprecursors의 절연에 사용되는 방법을 설명합니다. , 자궁에서 태아를 제거하는 대뇌 피질의 조직을 해부하고, 고립 대뇌 피질을 소화에 대한 절차는 표시됩니다.

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Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors. J. Vis. Exp. (2), e152, doi:10.3791/152 (2007).

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Abstract

기본 신경 줄기 세포 문화는 중추 신경 시스템 개발을 기본 메커니즘을 연구하는 데 유용합니다. 줄기 세포 연구는 신경계에 대한 우리의 이해를 증가하고 우리가 현재 불치의 뇌 질병 및 부상에 대한 치료를 개발할 수 있습니다. 또한, 줄기 세포가 신경 분화 및 transdifferentiation의 메커니즘 및 유전과 환경 신호의 세부적인 연구 목적으로 줄기 세포 연구에 사용해야 특정 세포 종류에 세포의 직접 전문. 이 동영상은 배아 일 12.5 마우스 지느러미의 forebrain에서 세포를 disaggregate하는 데 사용하는 기술을 보여줍니다. 해부 절차는 자궁에서 E12.5 마우스 배아를 수확 미세 해부 포셉으로 "피부"를 제거하고 마지막으로 대뇌 피질의 조각 격리가 포함되어 있습니다. 절개 후, 조직은 소화​​와 기계 dissociated 수 있습니다. resuspended dissociated 세포는 다음 신경 줄기 세포의 성장을 하시더군요 "줄기 세포"미디어에서 양식입니다.

Protocol

  1. 마우스 신경 엽 성의 전구 물질 (NPCs)는 E12.5 배아 대뇌 피질에서 격리되었다.
  2. 피부와 mesenchymal 레이어는 해부 telencephalic vesicles에서 제거되었습니다.
  3. Vesicles는 37 0.02 % EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 20 분 HBSS에 0.​​2 % BSA ° C.와 0.05 %의 트립신에 incubated되었습니다
  4. Trypsinization은 HBSS 1 MG / ML 대두 트립신 억제제의 동일한 볼륨 (시그마 # T6522)에 의해 중지되었습니다.
  5. 조직 화재 - 세련된 파스퇴르 pipettes로 분쇄 여러 라운드를 사용하여 dissociated되었습니다 요약.
  6. 세포 HBSS에 0.​​2 % BSA로 한 번 씻어 20 NG / ML EGF, 10 NG / ML FGF2 (R & D 시스템 또는 Peprotech), 2 UG / ML의 헤파린 (와 미디어에 laminin - 코팅 coverslips 50,000 세포 / ML에 도금했다 시그마).

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Discussion

CNS 개발과 줄기 세포 생물학에 대한 우리의 이해에 큰 발전이 배아 신경 줄기 세포를 수확 격리와 문화 능력에 의해 가능하게되었습니다. 이 비디오는 E12.5 마우스 대뇌 피질과 배아 신경 줄기 세포의 후속 disaggregation과 culturing의 절개를 보여줍니다. 다른 많은 다른 유사한 방법이 성공적으로 다른 수사관에 의해 고용되어있다.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Straight Iris Scissors Tool Fine Science Tools 14060-11
Medium Scissors Tool Fine Science Tools 15024-10
Micro Scissors Tool Fine Science Tools 15002-08
Bent Forceps Tool Fine Science Tools 11251-35

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132, (15), 3549-3559 (2005).
  2. Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).

Comments

3 Comments

  1. There are lots of mistakes about working in a steril conditions, the cap of the bottles should be plased upsode down.  No good lab practoce !

    Reply
    Posted by: Maryam M.
    April 20, 2009 - 2:31 PM
  2. Thanks, but no contamination in 6 years.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 20, 2009 - 4:34 PM
  3. I think it would be better to say "Culture of Mouse neural Stem (precursor) cells". You can not use both stem and precursor terms together.

    Reply
    Posted by: Hassan A.
    July 13, 2010 - 9:25 PM

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