Культура Мышь нейронных стволовых клеток прекурсоров

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Это видео описывает метод, используемый для изоляции neuroprecursors из развивающихся коры эмбриональных мышей. Процедура снятия эмбрионов из матки, рассекая корковой ткани, и перевариванием изолированных кора головного мозга показано на рисунке.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors. J. Vis. Exp. (2), e152, doi:10.3791/152 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Первичная нейронных культур стволовых клеток являются полезными для изучения механизмов, лежащих развития центральной нервной системы. Исследования стволовых клеток увеличится нашем понимании нервной системы и может позволить нам разработать методы лечения в настоящее время неизлечимых заболеваний головного мозга и травмы. Кроме того, стволовые клетки должны быть использованы для исследования стволовых клеток, направленных на детальное изучение механизмов нейронных дифференциации и трансдифференцировки и генетических и экологических сигналы, которые прямой специализации клеток в определенные типы клеток. Это видео демонстрирует метод, используемый для разбивки клетки эмбрионального день 12,5 передний мозг спинной мыши. Рассечение процедура включает в себя уборка E12.5 эмбрионов мыши из матки, удаление "кожу" с мелкими рассекает щипцы и, наконец, выделения кусков коры головного мозга. После вскрытия, ткань переваривается и механически диссоциирован. Ресуспендировали диссоциированных Затем клетки культивировали в "стволовая клетка" СМИ, что способствует росту нервных стволовых клеток.

Protocol

  1. Мышь нейронных прекурсоров (НПС) были выделены из эмбриона E12.5 коры головного мозга.
  2. Кожа и мезенхимальные слои были сняты с расчлененным telencephalic пузырьков.
  3. Пузырьки инкубировали в 0,05% трипсина с 0,02% ЭДТА и 0,2% BSA в HBSS в течение 20 минут при температуре 37 ° C.
  4. Трипсинизации был остановлен равным объемом 1 мг / мл соевого ингибитора трипсина (Sigma # T6522) в HBSS.
  5. Ткань дайджесты были диссоциированных с помощью нескольких раундов растирания с огневой полировкой пипетки Пастера.
  6. Клетки промывали один раз с 0,2% BSA в HBSS и помещали на 50 000 клеток / мл на ламинин покрытием покровных в средах с 20 нг / мл ЭФР, 10 нг / мл FGF2 (R & D Systems или Peprotech), и 2 мкг / мл гепарина ( Sigma).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Большие успехи в нашем понимании развития ЦНС и биологии стволовых клеток стало возможным благодаря нашей способности урожая, изолировать и культуру эмбриональных нервных стволовых клеток. В этом видеоролике показано рассечение E12.5 мыши коры головного мозга и последующее разукрупнения и культивирования эмбриональных нервных стволовых клеток. Многие другие другие подобные методы были успешно использованы другими исследователями.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Straight Iris Scissors Tool Fine Science Tools 14060-11
Medium Scissors Tool Fine Science Tools 15024-10
Micro Scissors Tool Fine Science Tools 15002-08
Bent Forceps Tool Fine Science Tools 11251-35

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132, (15), 3549-3559 (2005).
  2. Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).

Comments

3 Comments

  1. There are lots of mistakes about working in a steril conditions, the cap of the bottles should be plased upsode down.  No good lab practoce !

    Reply
    Posted by: Maryam M.
    April 20, 2009 - 2:31 PM
  2. Thanks, but no contamination in 6 years.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 20, 2009 - 4:34 PM
  3. I think it would be better to say "Culture of Mouse neural Stem (precursor) cells". You can not use both stem and precursor terms together.

    Reply
    Posted by: Hassan A.
    July 13, 2010 - 9:25 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics