Cultura de ratón con células madre neurales Precursores

Biology

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Summary

Este vídeo describe el método utilizado para el aislamiento de neuroprecursors de la corteza en desarrollo de embriones de ratones. El procedimiento para la eliminación de embriones del útero, la disección de los tejidos corticales, y la digestión de la corteza cerebral aislada se muestra.

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Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors. J. Vis. Exp. (2), e152, doi:10.3791/152 (2007).

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Abstract

Cultivos primarios de células madre neurales son útiles para el estudio de los mecanismos que subyacen al desarrollo del sistema nervioso central. Investigación con células madre aumenta nuestra comprensión del sistema nervioso y puede ayudarnos a desarrollar tratamientos para enfermedades actualmente incurables del cerebro y lesiones. Además, las células madre deben ser utilizadas para la investigación de células madre como objetivo el estudio detallado de los mecanismos de diferenciación neuronal y la transdiferenciación y las señales genéticas y ambientales que dirigen a la especialización de las células en un tipo celular particular. Este vídeo muestra una técnica utilizada para desagregar las células a partir del día embrionario 12.5 cerebro anterior dorsal del ratón. El procedimiento incluye la disección de la cosecha E12.5 embriones de ratón desde el útero, la eliminación de la "piel" con finas pinzas de disección y, finalmente, aislar trozos de la corteza cerebral. Después de la disección, el tejido se digiere y se disocian mecánicamente. Las células disociadas se resuspendieron luego se cultivaron en "células madre", los medios de comunicación que favorece el crecimiento de las células madre neurales.

Protocol

  1. Precursores neuronales de ratón (CPN) se aislaron de la corteza de embriones E12.5.
  2. Capas de la piel y mesenquimales fueron retirados de las vesículas telencefálicas disecados.
  3. Vesículas fueron incubadas en el 0,05% de tripsina al 0,02% de EDTA y 0,2% de BSA en HBSS durante 20 minutos a 37 ° C.
  4. Tripsinización fue detenido por un volumen igual de 1 mg / ml de inhibidor de tripsina de soja (Sigma # T6522) en HBSS.
  5. Digiere los tejidos se disocian con varias rondas de trituración con pulido al fuego pipetas Pasteur.
  6. Las células se lavaron una vez con el 0,2% de BSA en HBSS y chapada a 50.000 células / ml en laminina recubierto cubreobjetos en los medios de comunicación con 20 ng / EGF ml, 10 ng / ml FGF2 (R & D Systems o Peprotech), y 2 ug / ml de heparina ( Sigma).

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Discussion

Grandes avances en nuestra comprensión del desarrollo del SNC y la biología de células madre han sido posible gracias a nuestra capacidad de cosecha, aislar y cultivar células madre embrionarias neural. Este video muestra la disección de la corteza cerebral del ratón E12.5 y la desagregación posterior y el cultivo de células embrionarias madre neurales. Muchos otros métodos similares han sido utilizados con éxito por otros investigadores.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Straight Iris Scissors Tool Fine Science Tools 14060-11
Medium Scissors Tool Fine Science Tools 15024-10
Micro Scissors Tool Fine Science Tools 15002-08
Bent Forceps Tool Fine Science Tools 11251-35

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132, (15), 3549-3559 (2005).
  2. Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).

Comments

3 Comments

  1. There are lots of mistakes about working in a steril conditions, the cap of the bottles should be plased upsode down.  No good lab practoce !

    Reply
    Posted by: Maryam M.
    April 20, 2009 - 2:31 PM
  2. Thanks, but no contamination in 6 years.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 20, 2009 - 4:34 PM
  3. I think it would be better to say "Culture of Mouse neural Stem (precursor) cells". You can not use both stem and precursor terms together.

    Reply
    Posted by: Hassan A.
    July 13, 2010 - 9:25 PM

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