Isolering af Perivaskulær multipotente precursorcelle populationer fra humant hjertevæv

Developmental Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Developmental Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Humant hjertevæv huser multipotente perivaskulære precursor cellepopulationer, som kan være egnede til myocardial regenerering. Den her beskrevne teknik muliggør den samtidige isolering og oprensning af to multipotente stromale cellepopulationer forbundet med native blodkar, dvs. CD146 + CD34 - pericytter og CD34 + CD146 - adventitiaceller celler, fra den humane myocardium.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Baily, J. E., Chen, W. C., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Hjertet har længe været betragtet som et post-mitotisk organ. Imidlertid har nyere undersøgelser vist, at tilstedeværelsen af begrænset cardiomyocyte omsætning hos voksne menneskelige hjerter 1. Native stængel / stamceller med cardiomyocyte differentiering potentiale er også blevet identificeret i myokardiet hos voksne gnavere og menneskelige hjerter, herunder Sca-1 +, c-kit +, cardiosphere-dannende, og senest, perivaskulære præcursorceller 2,3. Disse celler udgør attraktive kandidater til behandlinger, der skal forbedre hjerte-reparation / regeneration gennem celle transplantation eller stimulering af in-situ spredning.

Mesenkymale stamceller / stromale celler (MSC) er blevet isoleret fra næsten alle humant væv 4,5 Kliniske forsøg med de terapeutiske anvendelser af MSC er blevet udført for flere patologiske tilstande, såsom kardiovaskulær reparation 6, graft-versus-host-sygdom 7 8. Gavnlige virkninger er blevet tilskrevet evne MSC til: hjem til inflammationssteder 9; differentiere til forskellige celletyper 10; udskiller pro-reparative molekyler 11; og modulere værtsimmunresponser 12. Isoleringen af ​​MSC'erne har traditionelt påberåbt sig deres fortrinsret overholdelse plastik substrater. Men den resulterende population af celler er typisk markant heterogen 13. Ved at bruge fluorescerende cellesortering (FACS) med en kombination af centrale perivaskulære cellemarkører, har vi været i stand til at isolere og oprense en multipotente MSC-lignende precursor population (CD146 + / CD31 - / CD34 - / CD45 - / CD56 -) fra multiple humane væv, herunder voksne skeletmuskulatur og hvid fedt 14.

Perivaskulære cellepopulationer i forskellige ikke-hjertevæv er blevet vist at have stamceller / stamceller egenskaber and bliver undersøgt til klinisk anvendelse i det kardiovaskulære indstilling. Pericyter, en af de mest kendte perivaskulære celle-undergrupper, er en heterogen population, der spille flere patofysiologiske roller, herunder i udviklingen af nye skibe 15, regulering af blodtrykket 16, og vedligeholdelse af vaskulær integritet 17,18. Som vist i flere væv, specifikke delmængder af pericytter indbygget udtrykke MSC-antigener og opretholde deres MSC-lignende fænotyper i primær kultur efter FACS rensning 14. Desuden er disse celler, der stabilt opretholder deres langsigtede fænotyper indenfor kultur og udviser multi-slægt differentiering potentiale, der ligner MSC'er 19,20. Disse resultater tyder på, at pericytter er en af oprindelsen af den undvigende MSC 14. Det terapeutiske potentiale af pericytter er påvist med en reduktion i myocardial ardannelse og forbedret hjertefunktion efter transplantation i iskæmisk skadethjerter 21. For nylig har vi med succes oprenset pericytter fra det menneskelige myocardium og demonstrerede deres MSC-lignende fænotyper og multipotency (adipogenese, chondrogenese og osteogenese) med fraværet af skelet myogenese 3. Desuden myocardiale pericytter udviste differentielle cardiomyogenic potentiale og angiogene kapacitet sammenlignet med modparter oprenset fra andre organer.

En anden population af multipotente perivaskulære stamceller / progenitorceller, den adventitiale celle, er blevet isoleret fra humane saphenous vener på grundlag af positive CD34-ekspression 22. Venøse adventitiaceller celler har vist sig at have klonogene potentiale, mesodermal differentiation kapacitet og proangiogen potentiale in vitro. Transplantation af disse celler i iskæmisk beskadigede hjerter mus resulterede i en reduktion i interstitiel fibrose, en stigning i angiogenese og myocardial blodgennemstrømning, reduceret ventrikulær dilation, og øget kardiel uddrivningsfraktion 23. Interessant nok har fedt-adventitiaceller celler vist sig at tabe CD34-ekspression og opregulere CD146 ekspressionen i kultur som reaktion på angiopoietin II behandling, hvilket tyder på vedtagelsen af en pericyt fænotype med stimulation 24. I hjertet, men den adventitiale cellepopulation er endnu ikke blevet prospektivt oprenset ved FACS og / eller godt karakteriseret. Ved hjælp af de celle isolation, der er beskrevet i de følgende afsnit, er vi i øjeblikket kendetegner myocardiale adventitiaceller celler og undersøge deres potentiale for regenerative applikationer.

Heri beskriver vi en fremgangsmåde til at isolere og oprense to subpopulationer af perivaskulære stamceller / progenitorceller fra human føtal eller voksen myokardiet. Denne prospektive celle isolation metode vil gøre det muligt for forskerne at opnå isogene perivaskulære stamceller / stamceller delmængder fra menneskelige hjerte biopsier for sammenlignende undersøgelser og further udforske deres terapeutiske potentiale i forskellige hjertelidelser patologiske tilstande.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Behandling af human Cardiac Sample

  1. Sørg for, at alle væsker, containere, instrumenter og den dedikerede operationelle område er sterile.
  2. Placer hjertevævet prøve (indkøbt af den vævsbank eller kirurgisk hold) i lagringsmedium sammensat af kølet Dulbeccos modificerede Eagle-medium (DMEM) indeholdende 20% føtalt bovint serum (FBS) og 1% penicillin-streptomycin (P / S) på is til transport 3.
  3. Fjern hjertets prøve fra lagringsmediet og vaskes med en vaskemedium sammensat af phosphatbufret saltvand (PBS) suppleret med 2% FBS og 1% P / S. Ved håndtering af prøven, brug fin tippes pincet til at gribe store skibe eller hjertesækken og minimere knusning af myokardiet.
  4. Sænk prøven i vask medium i en petriskål og fjern hjertesækken, endokardium og store blodkar med steriliserede iris saks og fine spids pincet som beskrevet 3.
  5. Skær de resterende myocardium i små stykker på ca. 1 mm 3 ved anvendelse af en enkelt side barberblad eller et par skarpe iris saks. Bemærk: Højeste celle udbytter opnås, hvis prøverne behandles straks. Hvis en forsinkelse er uundgåelig, oplagring af det forarbejdede hjertevæv i den friske lagermedium (> 5 ml pr 1 cm3 væv) ved 4 ° C i op til 72 timer er imidlertid muligt formentlig med en tilknyttet nedgang i cellen udbytte.

2. Fordøjelse af Tissue og Isolering Celler

  1. Frisk udgør fordøjelsen opløsning omfattende 1,5 ml af hver af collagenase I, collagenase II, og collagenase IV (alle ved 0,5 mg / ml i DMEM) og opvarm til 37 ° C i vandbad.
    Bemærk: Volumen og koncentration af kollagenaser er velegnede til prøver af ca. 1 cm 3.
  2. Filtrere suspenderede vævsstykker gennem en 100 um si og vaskes to gange med PBS. Overfør vævsstykkerne til et sterilt 30 ml beholder meden tæt forseglet låg.
    Bemærk: Korte brede pots snarere end høje smalle rør giver bedre resultater. Alternativt satte vævsstykker i et sterilt 50 ml rør og placere horisontalt hvis en 30 ml beholder er ikke tilgængelig.
  3. Tilføj alle fordøjelsen løsninger (4,5 ml i alt) og placere beholderen i en forseglet plasticpose i et 37 ° C rystevandbad sat til 120 rpm. Alternativt, forsegle beholderen med paraffin film og sted i en opvarmet orbitalryster indstillet til 120 rpm.
  4. Efter 15 minutter fjernes og vendes potten tre gange før udskiftning i yderligere 15 min. Fjern og slukke collagenaserne med 5 ml DMEM suppleret med 20% FBS og 1% P / S.
  5. Udriv digest ved forsigtigt at pipettere ti til tyve gange med en 10 ml serologisk pipette til at bryde op nogen væv klumper. Filtrer sekventielt suspensionen gennem 100 um, 70 um og endelig 40 um celle sier at fjerne ufordøjet materialer og opnå en enkelt cellesuspension.
    Note:Skyl ikke mellem celle sier at undgå celle debrisgenerated af enzymet fordøjelsesprocessen.
  6. Centrifuger cellesuspensionen ved 200 xg i 4 min, omhyggeligt dekanter supernatanten og resuspender pellet i 1 ml røde blodlegemer lyseringsbuffer i 2 minutter ved stuetemperatur før fortynding med 4 ml vaskemedium.
  7. Der centrifugeres trin og re-suspendere pellet i 1 ml vask medium. Bland godt og tage 10 pi af cellesuspensionen til celletælling.
  8. Bland 10 pi af cellesuspensionen med 10 pi Trypan blåsplint og anbringes 10 pi af blandingen på en standard hæmocytometer til celletælling. Tæl antallet af lyse, runde celler til stede i de fire hjørne kvadrater (hver opdelt i seksten små firkanter) og dividere med 4 for at få den gennemsnitlige per hjørne pladsen. Multiplicer middelværdien af 2 til betragtning ved pletten fortyndingsfaktoren og derefter med 10 4 for at opnå den totale antal celler per 1 ml prøve.

  1. Der tilsættes 50 pi museserum til cellesuspensionen og inkuberes ved 4 ° C i 20 minutter for at blokere ikke-specifik antistofbinding.
  2. Centrifuger cellesuspensionen med museserum ved 200 xg i 4 min, fjern supernatant, og resuspender i vaskemedium i en koncentration på 1 x 10 6 celler pr 100 pi.
  3. Aliquot 50 pi hver af cellesuspensionen for isotype og ufarvede kontroller i to polystyren rundbundet flowcytometri rør derefter placere den resterende volumen i en tredje rør for multi-farvning.
  4. Tilføj CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5, og CD146-AF647 antistoffer (alle 1: 100) til enkelt celle suspension til multi-farve farvning. For isotypekontrol, tilføje ækvivalente volumener af PE-, APC-Cy7-, PE-Cy7-, PerCP-Cy5.5- og AF647-konjugerede isotype antistoffer. Forsigtigt pipette til at blande antistofferne med cellerne og inkuberes alle rørene ved 4 ° C i 20minutter i mørke.
  5. Forbered kompensationskontrol perler ved tilsætning af en dråbe positive perler til 100 pi vaskemedium i fem polystyren rundbundede flow-cytometri rør. Tilføj CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5, og CD146-AF647 antistoffer (alle 1: 100) individuelt til hver af de 5 rør. Inkuber alle rør ved 4 ° C i 20 minutter i mørke.
  6. Under inkubationen, forberede celleudtagningsmetoden rør hver med 500 pi endotelvækstfaktor Medium-2 (EGM-2) dyrkningsmedium og anbringes ved 4 ° C.
  7. Efter antistof inkubation tilsættes 5 ml vaskemedium til at vaske celler og perler for at fjerne ubundet antistof. Centrifuge alle rør ved 200 xg i 4 min. Bundfaldet vaskes og centrifugeringstrin. dekanteres omhyggeligt supernatanten og pipette forsigtigt når resuspendere celler.
  8. Re-suspendere vask mediet i en koncentration på ca. 1 x 10 6 celler pr 250 pi. Re-suspendere perler i 100 ul vask medium.
  9. Transport alle celle- og perle suspensioner til cellen sorteringsanlæg på is i mørke. Tilsæt 1 dråbe af negative perler til de positive perle kompensationskontrol rør og bruge disse til at indstille fluorescens kompensation.
  10. Kør ufarvede kontrol celler ifølge producentens instruktioner til at etablere baggrunden fluorescens og sat spændingerne på følgende: FSC 150V; SSC 290V; V450 / 50 350V; V710 / 50 620V; B530 / 30 400V; B710 / 50 530V; YG780 / 60 460; R670 / 30 480V; R780 / 60 460V. Kør isotyper kontrol i henhold til producentens anvisninger for at etablere baggrund fluorescens tærskler i relation til ikke-specifik binding. Kør flerfarvede farvede prøve og indsamle pericyt og adventitiaceller cellepopulationer i indsamling rør de (figur 1).
    BEMÆRK: Optimale levedygtige celler udbytter er ca. 3% af den samlede levende celle dissociation for pericyter og 4% for adventitiaceller celler.

4. Cellekultur

  1. Vælg egnede størrelse dyrkningsplader efter udfaldet af FACS sortering. Tilsæt 100 pi sterilt 0,2% gelatine-opløsning pr cm2 vækstområde og agitere manuelt at overtrække hele brønde. Pladerne inkuberes ved 4 ° C i 10 minutter og fjern gelatineopløsning fuldstændigt. Hold opsamlede celler på is mens forberede dyrkningsplader.
    Bemærk: Frisk sorteret pericytter og adventitiaceller celler vokser godt, når podet med en tæthed på 30.000 til 40.000 celler / cm2 på gelatine-coatede kultur overflade.
  2. Centrifugeres frisk opsamlede celler ved 200 xg i 4 min og forsigtigt genopslæmmes cellepelleten i en passende mængde EGM-2.Seed cellerne på gelatine-coatede plader.
    Bemærk: Det faktiske antal celler, der skal podes per brønd, og mængden af ​​EGM-2, hvormed afhænger udvælgelsen plade. For eksempel er 1 ml EGM-2 behov 0,5 ml og per brønd for 48- og 24-brønds plader hhv.
  3. Exchange EGM-2 for perivaskulær cellevækst medium (DMEM suppleret med 20% FBS og 1% P / S) for begge pericytter og adventitiaceller celler, når cellerne har slået sig ned og levet op til pladen (efter mindst 72 timer). Skift medierne hver 72 timer fra da af. Udfør den første og alle efterfølgende inkubationer i 5% CO2 og ved 37 ° C.
  4. Dissociere celler under anvendelse af 0,05% trypsin EDTA når pericytter og adventitiaceller cellerne når 80 til 90% konfluens. Stands med 20% FBS i PBS, centrifugeres ved 200 xg i 4 min, re-suspendere perivaskulær celle vækstmedium og derefter passage af cellerne ved en 1: 3-forhold på ikke-coatede polystyren dyrkningsplader. Fra Passage 2 og fremefter, passage-celler ved en 1: 5-forhold (eller ved ca. 7.000 celler / cm2) til ikke-overtrukne polystyren dyrkningsplader eller kolber.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Enkelte celler blev adskilt fra snavs og dubletter på grundlag af fremadrettet og sideværts scatter distributioner. Levende celler blev identificeret ved deres manglende evne til at tage op DAPI farvestof. Gating strategi blev valgt på grundlag af isotypekontrol mærkning af denne levende, hel-kardiale celle dissociation (figur 1). Fra de levende celler, blev CD45 + -celler først gated ud, efterfulgt af CD56 + celler. CD144 + endotelceller blev derefter fjernet fra CD56 - fraktionen. Fra denne endelige population, CD146 + / CD34 - pericytter og CD146 - blev / CD34 + adventitiaceller celler udvalgt og efterfølgende opsamlet (figur 2). Umiddelbart efter celle indsamling, en lille prøve af hver delpopulation (500-1.000 celler) blev re-run gennem sorteringsanlæg at bekræfte, at celle fordeling var som registreret i den indledende sortering. FACS-oprensede myocardial Peric ytes og adventitiaceller celler begge udviser en spindel til stjerneformet cellemorfologi i kultur (figur 3).

figur 1
Figur 1:. FACS gating-strategi Repræsentative dots afbildninger af isotypekontrol mærket dissocierede humane hjerte celler illustrerer placeringen af den slags porte .. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2: FACS Oprensning af myokardial perivaskulære celler repræsentant sortering af de to subpopulationer af kardiale perivaskulære precursorceller fra en enkelt human myocardial prøve..es / ftp_upload / 54.252 / 54252fig2large.jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Figur 3:. Perivaskulær Cell Morfologi i Kultur De to kardiale perivaskulære forløber cellepopulationer, pericytter (venstre panel) og adventitiaceller celler (højre) blev sorteret til homogenitet ved FACS oprensning og yderligere udvidet i kultur (ved passage 3, Scale barer = 50 um ). klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Stigende beviser understøtter en begrænset regenerativ kapacitet af den voksne menneskelige hjerte efter skade. Identifikation og karakterisering af indfødte precursorceller ansvarlige for sådanne regenerative reaktioner i tilskadekomne hjerter er afgørende for både forståelsen af ​​tilknyttede mekanismer og signalveje og udvikling af metoder til at udnytte disse celler terapeutisk.

Tidligere protokoller har beskrevet isoleringen af perivaskulære precursor celle-undergrupper fra human skeletmuskel 25. Men den direkte anvendelse af disse teknikker til hjertevæv resulterer ofte i meget dårlige celle udbytter. Derfor har vi gjort store justeringer af protokollen for at berige to diskrete subpopulationer af perivaskulære præcursorceller, nemlig pericytter og adventitiaceller celler, fra humane myokardiale biopsier og lette den samtidige rensning af begge delmængder. Isolering af begge cellepopulationer fra Same prøve ikke kun optimerer brugen af ​​ædle hjertevæv biopsier, men giver også mulighed for direkte sammenligning af forskellige perivaskulære celle delmængder.

For at opnå det maksimale udbytte af celler, friskhed vævsprøven er af afgørende betydning. Maksimale levedygtige celler udbytter for pericytter og adventitiaceller celler er ca. 3% og 4% af den samlede levende celle dissociation hhv. Udbyttet kan variere meget fra omkring 30.000 til 400.000 celler pr delmængde og er meget afhængige af en række faktorer, herunder størrelsen og kvaliteten af ​​udgangs væv og bevarelsen varighed. Perivaskulære celler er relativt sarte; prøver viser tegn på autolytisk forandringer uvægerligt giver lavt celletal efter FACS. Tilsvarende perivaskulære celler er følsomme for barske fordøjelse teknikker, og over-fordøjelse vil også resultere i en reduceret levedygtig udbytte celle. Tilpassede justeringer af fordøjelsen tid og omrøringshastighed kan være nødvendig ved individual laboratorier. Endelig vil donor alder og stikprøvestørrelse også få store konsekvenser for celle udbytter.

Vi har grundigt karakteriseret kardiale pericytter opnået på denne måde 3. Disse celler demonstrerede homogenitet i kultur uden endotel kontaminering celle. Befolkning fordobling tider på omkring 60 timer mellem passagerne 3 og 12 blev noteret med konsekvent ekspression af begge fælles pericyt markører (alkalisk fosfatase, NG2 og α-SMA) og klassiske MSC markører (CD44, CD73, CD90 og CD105) i denne periode. Interessant nok blev det konstateret, at efter demethylering, en brøkdel af hjerte- pericytter udtrykte cardiomyogenic transkriptionsfaktorer Nkx2.5 og GATA4. Når co-dyrket med neonatale rottecardiomyocytter, en brøkdel af demethylerede kardiale pericytter udtrykte sarcomerisk proteinmarkører alfa-actinin og kardial troponin-T, med en mindre gruppe yderligere udstiller spontane cytoplasmatiske calciumstrømninger. Tilsammen disse resultater suggest at en subpopulation af kardiale pericytter besidder cardiomyogenic potentiale og derfor kan spille en rolle i den iboende myocardial reparationsprocessen. I sammenligning med pericyter, hjerte-adventitiaceller celler stort set karakteriseret. Vores upublicerede foreløbige data tyder på, at hjerte-adventitiaceller celler udtrykker nogle pericyt markører såsom PDGFR-β og NG2, om end på et lavere niveau end hjerte-pericytter, mens miste CD34 i kultur. Disse celler udtrykker også klassiske MSC markører og vise osteogen og adipogenisk differentiering potentiale. Yderligere undersøgelser af hjerte-adventitiaceller celler, herunder angiogene og pro-cardiogene egenskaber er i gang.

Den her beskrevne protokol muliggør samtidig, prospektivt rensning af hjerte pericytter og adventitiaceller celler fra en enkelt menneskeligt hjerte-vævsprøve. Disse celler repræsenterer nye cardiac forløber celle populationer med potentielle cardiomyogenic egenskaber, der kan vise sig at være egnet candidates til fremtidige celleterapi.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AbC Anti-mouse Bead Kit Molecular Probes A-10344
Collagenase I Gibco 17100-017 Reconstitute powder as required and filter sterilise
Collagenase II Gibco 17101-015
Collagenase IV Gibco 17104-019
anti-human CD34-PE BD Pharmingen 555822 Keep sterile
anti-human CD45-APC-Cy7 BD Pharmingen 557833 Keep sterile
anti-human CD56-PE-Cy7 BD Pharmingen 557747 Keep sterile
anti-human CD144-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
anti-human CD146-AF647 AbD Serotec MCA2141A647 Keep sterile
EGM2-BulletKit Lonza CC-3162 For collection of cells and culture until adhered
DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate ThermoFischer Scientific 10566-016
Fetal Bovine Serum ThermoFischer Scientific 10500-064 Freeze in aliquots and keep sterile
Gelatin Sigma Aldrich G1393 Dilute with sterile water
IgG1k-PE BD Pharmingen 559320 Keep sterile
IgG1k-APC-Cy7 BD Pharmingen 557873 Keep sterile
IgG1k-PE-Cy7 BD Pharmingen 557872 Keep sterile
IgG1k-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
IgG1k-647 AbD Serotec MCA1209A647 Keep sterile
Mouse serum Sigma Aldrich M5905 Keep sterile
Paraffin Film - Parafilm M Sigma Aldrich P7793
Penicillin-Streptomycin Gibco 15979-063 Freeze in aliquots and keep sterile
Phosphate buffered saline pH 7.4 ThermoFischer Scientific 10010-023 Keep sterile
Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max Sigma Aldrich R7757 Keep sterile
Trypan Blue Solution Sigma Aldrich T8154
Trypsin-EDTA 0.5%(10x) Invitrogen 15400-054
 FACSARIA FUSION BD Pharmingen Fluorescence Activated Cell Sorter

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science (New York, N.Y.). 324, (5923), 98-102 (2009).
  2. Laflamme, A., Murry, C. E. Heart regeneration. Nature. 473, (7347), 326-335 (2011).
  3. Chen, W. C. W., et al. Human myocardial pericytes: multipotent mesodermal precursors exhibiting cardiac specificity. Stem cells (Dayton, Ohio). 33, (2), 557-573 (2015).
  4. Campagnoli, C., Roberts, I. A., Kumar, S., Bennett, P. R., Bellantuono, I., Fisk, N. M. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal. Blood. 98, (8), 2396-2402 (2001).
  5. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular biology of the cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  6. Chen, S., et al. Effect on left ventricular function of intracoronary transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell in patients with acute myocardial infarction. The American journal of cardiology. 94, (1), 92-95 (2004).
  7. Ringdén, O., et al. Mesenchymal stem cells for treatment of therapy-resistant graft-versus-host disease. Transplantation. 81, (10), 1390-1397 (2006).
  8. Kharaziha, P., et al. Improvement of liver function in liver cirrhosis patients after autologous mesenchymal stem cell injection: a phase I-II clinical trial. European journal of gastroenterology & hepatology. 21, (10), 1199-1205 (2009).
  9. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene therapy. 15, (10), 730-738 (2008).
  10. Yan, X., et al. Injured microenvironment directly guides the differentiation of engrafted Flk-1(+) mesenchymal stem cell in lung. Experimental hematology. 35, (9), 1466-1475 (2007).
  11. Van Poll, D., et al. Mesenchymal stem cell-derived molecules directly modulate hepatocellular death and regeneration in vitro and in vivo. Hepatology (Baltimore, Md.). 47, (5), 1634-1643 (2008).
  12. Popp, F. C., et al. Mesenchymal stem cells can induce long-term acceptance of solid organ allografts in synergy with low-dose mycophenolate. Transplant immunology. 20, (1-2), 55-60 (2008).
  13. Li, Z., Zhang, C., Weiner, L. P., Zhang, Y., Zhong, J. F. Molecular characterization of heterogeneous mesenchymal stem cells with single-cell transcriptomes. Biotechnology advances. 31, (2), 312-317 (2013).
  14. Crisan, M., et al. A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs. Cell stem cell. 3, (3), 301-313 (2008).
  15. Ozerdem, U., Stallcup, W. B. Early contribution of pericytes to angiogenic sprouting and tube formation. Angiogenesis. 6, (3), 241-249 (2003).
  16. Rucker, H. K., Wynder, H. J., Thomas, W. E. Cellular mechanisms of CNS pericytes. Brain research bulletin. 51, (5), 363-369 (2000).
  17. Betsholtz, C. Insight into the physiological functions of PDGF through genetic studies in mice. Cytokine & Growth Factor Reviews. 15, (4), 215-228 (2004).
  18. Gerhardt, H., Betsholtz, C. Endothelial-pericyte interactions in angiogenesis. Cell and tissue research. 314, (1), 15-23 (2003).
  19. Crisan, M., Chen, C. W., Corselli, M., Andriolo, G., Lazzari, L., Péault, B. Perivascular multipotent progenitor cells in human organs. Annals of the New York Academy of Sciences. 1176, 118-123 (2009).
  20. Kang, S. G., et al. Isolation and perivascular localization of mesenchymal stem cells from mouse brain. Neurosurgery. 67, (3), 711-720 (2010).
  21. Chen, C. W., et al. Human pericytes for ischemic heart repair. Stem cells (Dayton, Ohio). 31, (2), 305-316 (2013).
  22. Campagnolo, P., et al. Human adult vena saphena contains perivascular progenitor cells endowed with clonogenic and proangiogenic potential. Circulation. 121, (15), 1735-1745 (2010).
  23. Katare, R., et al. Transplantation of human pericyte progenitor cells improves the repair of infarcted heart through activation of an angiogenic program involving micro-RNA-132. Circulation research. 109, (8), 894-906 (2011).
  24. Corselli, M., Chen, C. W., Sun, B., Yap, S., Rubin, J. P., Péault, B. The Tunica Adventitia of Human Arteries and Veins As a Source of Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells and Development. 21, (8), 1299-1308 (2012).
  25. Crisan, M., et al. Purification and long-term culture of multipotent progenitor cells affiliated with the walls of human blood vessels: myoendothelial cells and pericytes. Methods in cell biology. 86, 295-309 (2008).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics