C. elegans 性腺外翻：一种快速解剖技术

摘要

来源：Gervaise, A. L. 和 Arur, S. 活性ERK在时空上的分析 秀丽隐杆线虫 生殖系. 视频实验杂志 (2016).

本视频介绍了一种从成年C. elegans雌雄同体线虫中分离性腺的实验方法，所获得的组织适用于免疫染色和荧光成像。

方案

本实验方案节选自 Gervaise 和 Arur 的视频文章《秀丽隐杆线虫生殖系中活化 ERK 的时空分析》（Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline），《视觉化实验杂志》（J. Vis. Exp.）(2016年)。

1. 获取性腺的成虫解剖

1. 挑选100–150条野生型（N2）或所需基因型的线虫，处于所需且特定的发育阶段（L1、L2、L3、L4、成虫） 等等在1.5 mL微量离心管中，加入100 µL M9缓冲液。
2. 向微量离心管中加入 900 µL M9 缓冲液（参见 材料表). 在常温下，将离心管于微量离心机中以1,000 × g离心1分钟。
3. 轻轻移除 900 µL 的 M9 缓冲液并弃去。在解剖显微镜下移除缓冲液，以确保不会意外移走线虫。
4. 重复步骤1.2至1.3两次，每次使用新鲜的M9缓冲液。此操作可有效去除随线虫带入的任何细菌。
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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
平底玻璃培养皿	Agar Scientific	AGL4161	我们使用玻璃器皿，因为解剖后的性腺常会黏附在塑料表面
25 G 针头	BD PrecisionGlide	305122
注射器（可选用 1 或 5 mL）	BD Syringes	1 mL: BD 309659
显微镜载玻片（25 × 75 × 1.0 mm）	Fisherbrand	12-550-343
临床台式离心机
*M9 溶液
左旋咪唑	Sigma	L9756
*M9 缓冲液配方			3 g KH2PO4，6 g Na2HPO4，5 g NaCl，1 mL 1 M MgSO4，加 H2O 至 1 L。