Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Encyclopedia of Experiments

حقن العظام في وسادة الدهون الثديية: إنشاء سرطان الثدي في الفئران

Overview

في هذه المقالة نناقش كيفية إنشاء نموذج سرطان الثدي في الفئران الإناث عن طريق حقن خلايا سرطان الثدي في وسادة الدهون الثديية. يوضح البروتوكول المثال حقن تقويم العظام.

Protocol

وأجريت التجارب على الحيوانات وفقا للحكم والتوصية العامة لتشريع الإدارة الحيوانية التجريبية الصينية ووافقت عليها لجنة مؤسسة رعاية الحيوان واستخدامه التابعة للجامعة الطبية الرأسمالية (المرجع رقم 1999). AEEI-2014-052). أنثى Balb / ج الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين 6 إلى 8 أسابيع استخدمت.

1. إعداد الخلايا والحيوانات

  1. قبل يوم واحد من العملية، حلق الشعر حول الحلمات الرابعة لكشف منطقة التشغيل.
    1. استخدام يد واحدة لعقد الماوس بإحكام في الجزء الخلفي للتأكد من الماوس لن تتحرك بحرية، بدوره حتى الماوس لفضح بطنه للمشغل، ومن ثم استخدام يد أخرى لحلاقة الفراء حول الحلمات الرابعة مع ماكينة حلاقة الإلكترونية.
    2. وضع طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر حول الحلمات لمدة 30-60 ق، وتنظيف كريم بعيدا مع الماء المقطر، ومن ثم تجفيف الماوس مع ورقة ناعمة.
  2. في يوم العملية، جمع خلايا سرطان الثدي مورين (4T1-luc2)، عد عدد الخلايا، وضبط كثافة الخلية إلى 2 × 105 خلايا / مل في المالحة العازلة بالفوسفات (PBS) في أنابيب الطرد الدقيق العقيمة والاحتفاظ بها على الجليد. لكل فأر، يتم إعداد 1 ×10 4 خلايا/50 ميكرولتر في حقنة 1 مل.

2. حقن العظام

  1. تخدير الفئران
    1. حث التخدير. وضع الفئران في حاوية شفافة مغلقة وبدوره على الغاز isoflurane 2٪ لتخدير الفئران لمدة 5 دقائق، حتى أنها جميعا الاستلقاء وتغفو.
    2. الحفاظ على التخدير. نقل الفئران من الحاوية إلى أقنعة التخدير الفردية، ووضع بعض مرهم الطبيب البيطري على عيونهم لتجنب الجفاف، والحفاظ على الفئران supinely مع الحلمات عرضة للمشغل، والسماح لهم الاستمرار في استنشاق غاز ايزوفلوران لبضع دقائق حتى يتم إجراء الحقن.
    3. تأكيد نجاح التخدير بسبب عدم وجود إصبع القدم قرصة الانسحاب منعكس.
    4. تطبيق مرهم العيون على عيون الفئران لمنع جفاف العين.
      ملاحظة: وفقا لحجم الحاوية وعدد أقنعة التخدير الفردية المتاحة ، يمكن تخدير مجموعة من الفئران معا وحقنها واحدا تلو الآخر تحت التخدير الفردي.
  2. أداء الحقن
    1. استخدام يد واحدة لخيمة حتى الجلد حول الحلمة الرابعة مع ملاقط، لإعداد رفع "نفق" للمحقنة لمتابعة. استخدام اليد الأخرى لعقد حقنة مع الإبرة تحولت صعودا لدخول الجلد تحت الجلد في 5-10 ملم من الحلمة. ثم، اتبع "النفق" حتى تلميح إبرة يقترب من الحلمة، وتحريك بعناية تلميح إبرة تصل إلى لوحة الدهون الثديي حتى العين إبرة يأتي تحت طرف الحلمة، والتخلص من ملاقط، وحقن الخلايا ببطء.
    2. بدوره حول الإبرة قليلا والتراجع عن حقنة ببطء; استخدام مسحة القطن للضغط على الجرح إبرة لمدة 10 -20 ق للتأكد من عدم وجود تسرب السوائل.
    3. مراقبة الحلمة الرابعة لتأكيد حقنة ناجحة: واحد أبيض شفاف الكرة المسطحة مع الحلمة كما يمكن ملاحظة المركز(الشكل 1).
  3. حافظ على تخدير الفئران لمدة دقيقة أخرى لتجنب السماح للفئران بالتعافي والتحرك بسرعة كبيرة ، مما سيؤدي إلى فتح جرح الحقن وتسرب الخلايا السرطانية.

Figure 1
الشكل 1: صور قبل وبعد الحقن التقويمي في وسادة الدهون الثديية من الفئران بالب / ج الإناث. تم إجراء العملية ، وتم التقاط الصور بينما كانت الفئران تحت تخدير isoflurane. قبل الحقن،بعد الحقن.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
anesthesia machine Midmark Corporation, Dayton, OH, USA Matrx VMS anesthesia
 isoflurane Hebei yipin chemical reagents  company O21400 anesthesia
1 mL syringe Becton, Dickinson and  Company A257 cell injection
hair removal cream Veet - hair removal cream
Carbomer Eye Gel Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH - ophthalmic ointment

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

قيمة فارغة، مشكلة ،
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter