Inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria: Establecimiento de cáncer de mama en ratones

Overview

En este artículo discutimos cómo establecer un modelo de cáncer de mama en ratones hembra inyectando células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria. El protocolo de ejemplo muestra la inyección ortotópica.

Protocol

Los experimentos con animales se llevaron a cabo de conformidad con la Disposición y recomendación general de la legislación china de administración experimental de animales y fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica capitalina (Ref no. AEEI-2014-052). Se utilizaron ratones hembra balb/c de 6 a 8 semanas.

1. Preparación de las células y animales

1. Un día antes de la operación, afeitar el cabello alrededor de los cuartos pezones para exponer el área de operación.
   1. Utilice una mano para sujetar el ratón firmemente en la parte posterior para asegurarse de que el ratón no se mueva libremente, suba el ratón para exponer su vientre al operador y luego use otra mano para afeitar el pelaje alrededor de los cuartos pezones con una afeitadora electrónica.
   2. Coloque una fina capa de crema para la depilación alrededor de los pezones durante 30 - 60 s, limpie la crema con agua destilada y luego seque el ratón con papel suave.
2. El día de la operación, recoger células de cáncer de mama murino (4T1-luc2), contar el número de células, y ajustar la densidad celular a 2 x 10⁵ células / ml en solución salina amortiguada por fosfato (PBS) en tubos estériles de microcentrífuga y mantenerlos en hielo. Para cada ratón, se prepara 1 x^{10 4} celdas/50 μL en una jeringa de 1 ml.

2. Inyección ortotópica

1. Anestesia de ratones
   1. Inducir anestesia. Ponga a los ratones en un recipiente transparente cerrado y encienda el gas isoflurano al 2% para anestesiar a los ratones durante unos 5 minutos, hasta que todos se acuesten y se queerman dormidos.
   2. Mantener anestesia. Transfiera los ratones del recipiente a máscaras de anestesia individuales, coloque algún ungüento veterinario en sus ojos para evitar la sequedad, mantenga a los ratones supinamente con sus pezones expuestos al operador y déjelos seguir inhalando gas isoflurano durante unos minutos hasta que se haya realizado la inyección.
   3. Confirme el éxito de la anestesia por la falta de un reflejo de abstinencia de pellizcar el dedo del pie.
   4. Aplique ungüento oftálmico a los ojos de los ratones para evitar la sequedad ocular.
      NOTA De acuerdo con el tamaño del contenedor y el número de máscaras de anestesia individuales disponibles, un grupo de ratones puede ser anestesiado juntos e inyectado uno por uno bajo anestesia individual.
2. Rendimiento de la inyección
   1. Usa una mano para ensillar la piel alrededor del cuarto pezón con pinzas, para establecer un "túnel" elevado para que la jeringa lo siga. Utilice la otra mano para sujetar la jeringa con la aguja girada hacia arriba para entrar en la piel subcutáneamente a 5 - 10 mm del pezón; luego, siga el "túnel" hasta que la punta de la aguja se acerque al pezón, mueva cuidadosamente la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria hasta que el ojo de la aguja caiga debajo de la punta del pezón, deseche las pinzas e inyecte las células lentamente.
   2. Gire un poco la aguja y retraiga la jeringa lentamente; utilizar un hisopo de algodón para presionar la herida de la aguja durante 10 - 20 s para asegurarse de que no hay filtración de líquido.
   3. Observe el cuarto pezón para confirmar una inyección exitosa: una esfera plana transparente blanca con el pezón como se puede observar el centro (Figura 1).
3. Mantenga a los ratones anestesiados durante un minuto más para evitar que los ratones se recuperen y se muevan demasiado rápido, lo que hará que la herida de inyección se abra y las células tumorales se escapen.

Figura 1: Imágenes antes y después de la inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria de ratones Balb/c hembras. La operación se realizó, y las imágenes fueron tomadas mientras los ratones estaban bajo anestesia isoflurano. A, antes de la inyección, B, después de lainyección.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment