Injection orthotopique dans le tampon de graisse mammaire : établir le cancer du sein chez les souris

Overview

Dans cet article, nous discutons de la façon d’établir un modèle de cancer du sein chez les souris femelles en injectant des cellules cancéreuses du sein dans la graisse mammaire pad. Le protocole d’exemple démontre l’injection orthotopique.

Protocol

Les expériences sur les animaux ont été menées conformément à la Disposition et à la Recommandation générale de la Législation chinoise sur l’administration expérimentale des animaux et ont été approuvées par le Comité des soins et de l’utilisation des animaux de l’Université médicale capital (Réf no. AEEI-2014-052). Des souris femelles de Balb/c âgées de 6 à 8 semaines ont été employées.

1. Préparation des cellules et des animaux

1. Un jour avant l’opération, raser les cheveux autour des quatrièmes mamelons pour exposer la zone d’opération.
   1. Utilisez une main pour tenir la souris fermement à l’arrière pour s’assurer que la souris ne se déplacera pas librement, tourner la souris pour exposer son ventre à l’opérateur, puis utiliser une autre main pour raser la fourrure autour du quatrième mamelon avec un rasoir électronique.
   2. Mettez une fine couche de crème d’épilation autour des mamelons pendant 30 - 60 s, nettoyez la crème avec de l’eau distillée, puis séchez la souris avec du papier souple.
2. Le jour de l’opération, recueillir les cellules cancéreuses du sein murine (4T1-luc2), compter le nombre de cellules, et ajuster la densité cellulaire à 2 x 10⁵ cellules/mL dans la solution saline tamponnée de phosphate (PBS) dans les tubes stériles de microcentrifugeuse et les garder sur la glace. Pour chaque souris, 1 x 10⁴ cellules/50 μL dans une seringue de 1 mL est préparé.

2. Injection orthotopique

1. Anesthésie des souris
   1. Induire une anesthésie. Mettez les souris dans un récipient transparent fermé et allumez 2% de gaz isoflurane pour anesthésier les souris pendant environ 5 min, jusqu’à ce qu’elles s’allongent toutes et s’endorment.
   2. Maintenir l’anesthésie. Transférez les souris du récipient aux masques d’anesthésie individuels, mettez un peu d’onguent vétérinaire sur leurs yeux pour éviter la sécheresse, gardez les souris supinely avec leurs mamelons exposés à l’opérateur, et laissez-les continuer à inhaler le gaz isoflurane pendant quelques minutes jusqu’à ce que l’injection ait été effectuée.
   3. Confirmez le succès de l’anesthésie par l’absence d’un réflexe de retrait de pincement des pieds.
   4. Appliquer de l’onguent ophtalmique sur les yeux des souris pour éviter la sécheresse oculaire.
      NOTE (EN) Selon la taille du récipient et le nombre de masques d’anesthésie individuels disponibles, un groupe de souris peut être anesthésié ensemble et injecté un par un sous anesthésie individuelle.
2. Performance de l’injection
   1. Utilisez une main pour la tente jusqu’à la peau autour du quatrième mamelon avec des pinces à épiler, pour mettre en place un « tunnel » soulevé pour la seringue à suivre. Utilisez l’autre main pour tenir la seringue avec l’aiguille tournée vers le haut pour entrer dans la peau sous-cutanée à 5 - 10 mm du mamelon; ensuite, suivez le « tunnel » jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille s’approche du mamelon, déplacez soigneusement la pointe de l’aiguille vers le haut dans la garniture de graisse mammaire jusqu’à ce que l’œil de l’aiguille passe sous la pointe du mamelon, jetez les pinces et injectez les cellules lentement.
   2. Tournez un peu autour de l’aiguille et rétractez la seringue lentement; utiliser un coton-tige pour appuyer sur la plaie de l’aiguille pendant 10 à 20 s pour s’assurer qu’il n’y a pas d’infiltration de liquide.
   3. Observez le quatrième mamelon pour confirmer une injection réussie : une sphère plate transparente blanche avec le mamelon comme centre peut être observée (figure 1).
3. Gardez les souris anesthésiées pendant une autre minute pour éviter de laisser les souris récupérer et se déplacer trop rapidement, ce qui provoquera l’ouverture de la plaie d’injection et la fuite des cellules tumorales.

Figure 1 : Photos avant et après l’injection orthotopique à la graisse mammaire des souris femelles Balb/c. L’opération a été effectuée, et les photos ont été prises alors que les souris étaient sous anesthésie isoflurane. A, avant injection, B, après injection.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment