骨质注射到乳腺脂肪垫：在小鼠中建立乳腺癌

Overview

在本文中，我们讨论了如何通过将乳腺癌细胞注射到乳腺脂肪垫中来建立雌性小鼠的乳腺癌模型。示例协议演示了矫色注射。

Protocol

动物实验是按照《中国实验动物管理立法规定》和《总体建议》进行的，经首都医科大学动物保护与使用委员会批准（参考号）AEE-2014-052）。使用了6至8周的雌性Balb/c小鼠。

1. 细胞和动物的准备

1. 手术前一天，在第四个周围剃光头发，露出手术区域。
   1. 用一只手把鼠标紧紧地抱在后面，确保鼠标不会自由移动，打开鼠标向操作员暴露其腹部，然后用另一只手用电子剃须刀剃掉第四个周围的毛皮。
   2. 在上涂上一层薄薄的脱毛霜，涂上 30 - 60s ，用蒸馏水清洗奶油，然后用软纸擦干鼠标。
2. 手术当天，收集乳癌细胞（4T1-luc2），计算细胞数量，并将细胞密度调整为磷酸盐缓冲盐水（PBS）中的^{2×10 5}细胞/mL，并将其保持在冰上。每只鼠标都准备1 x 10⁴个细胞/50 μL的1mL注射器。

2. 矫板注射

1. 老鼠麻醉
   1. 诱导麻醉。将小鼠放入一个封闭的透明容器中，打开2%的异氟烷气体对小鼠进行麻醉约5分钟，直到它们都躺下入睡。
   2. 保持麻醉。将小鼠从容器转移到单独的麻醉口罩，在眼睛上涂上一些兽医软膏以避免干燥，让小鼠用向操作员暴露，并让它们继续吸入异氟烃气体几分钟，直到注射完成。
   3. 确认麻醉的成功，缺乏脚趾捏戒断反射。
   4. 将眼药膏涂抹在小鼠的眼睛上，以防止眼睛干燥。
      注释 根据容器大小和可用的单独麻醉口罩的数量，一组小鼠可以一起麻醉，并在个别麻醉下逐一注射。
2. 注射的性能
   1. 用一只手用钳子把第四个周围的皮肤搭起来，为注射器设置一个提升的隧道。用另一只手拿着注射器，用针头向上转动，从进入皮肤皮下 5 - 10 毫米：然后，按照隧道，直到针尖接近，小心地移动针尖到乳腺脂肪垫，直到针眼下尖，丢弃钳子，并慢慢注射细胞。
   2. 稍微转动一下针头，慢慢收回注射器：使用棉签按针伤口10-20s，以确保没有液体渗漏。
   3. 观察第四个，以确认成功注射：一个白色透明平球与为中心可以观察（图 1 ）。
3. 让小鼠麻醉一分钟，避免让小鼠恢复和移动太快，这将导致注射伤口打开和肿瘤细胞泄漏。

图1：在雌性Balb/c小鼠乳腺脂肪垫的矫形注射前后图片。手术是做，照片是在老鼠接受异氟乙烯麻醉时拍摄的。A，注射前，B，注射后。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment