Ortotopisk injeksjon i mammaryfettputen: Etablering av brystkreft hos mus

Overview

I denne artikkelen diskuterer vi hvordan du etablerer en brystkreftmodell hos kvinnelige mus ved å injisere brystkreftceller i brystfettputen. Eksempelprotokollen demonstrerer den ortotopiske injeksjonen.

Protocol

Dyreforsøk ble utført i samsvar med bestemmelsen og den generelle anbefalingen av kinesisk eksperimentell dyreforvaltningslovgivning og ble godkjent av Institution of Animal Care and Use Committee of Capital Medical University (refnr. AEEI-2014-052). Kvinnelige Balb/c mus i alderen 6 til 8 uker ble brukt.

1. Forberedelse av celler og dyr

1. En dag før operasjonen barberer du håret rundt de fjerde brystvortene for å eksponere operasjonsområdet.
   1. Bruk den ene hånden til å holde musen tett på baksiden for å sikre at musen ikke beveger seg fritt, skru opp musen for å eksponere magen for operatøren, og bruk deretter en annen hånd til å barbere pelsen rundt de fjerde brystvortene med en elektronisk barbermaskin.
   2. Legg et tynt lag med hårfjerningskrem rundt brystvorten i 30 - 60 s, rengjør kremet med destillert vann, og tørk deretter musen med mykt papir.
2. På operasjonsdagen samler du murin brystkreftceller (4T1-luc2), teller cellenummeret og justerer celletettheten til 2 x 10⁵ celler / ml i fosfatbufret saltvann (PBS) i sterile mikrocentrifugerør og holder dem på is. For hver mus fremstilles 1 x 10⁴ celler / 50 μL i en 1 ml sprøyte.

2. Ortotopisk injeksjon

1. Anestesi av mus
   1. Induser anestesi. Sett musene i en lukket gjennomsiktig beholder og slå på 2% isoflurangass for å bedøve musene i ca 5 min, til de alle legger seg ned og sovner.
   2. Oppretthold anestesi. Overfør musene fra beholderen til individuelle anestesimasker, legg litt veterinærsalve på øynene for å unngå tørrhet, hold musene supinely med brystvorten utsatt for operatøren, og la dem fortsette å inhalere isoflurangass i noen minutter til injeksjonen er utført.
   3. Bekreft suksessen til anestesi ved mangel på tå klype abstinensrefleks.
   4. Påfør oftalmisk salve på musenes øyne for å forhindre tørrhet i øynene.
      MERKNAD I henhold til beholderstørrelsen og antall individuelle anestesimasker tilgjengelig, kan en gruppe mus bedøves sammen og injiseres en etter en under individuell anestesi.
2. Injeksjonens ytelse
   1. Bruk den ene hånden til å telte opp huden rundt den fjerde brystvorten med pinsett, for å sette opp en oppløftet "tunnel" som sprøyten skal følge. Bruk den andre hånden til å holde sprøyten med nålen vendt oppover for å komme inn i huden subkutant ved 5 - 10 mm fra brystvorten; Følg deretter "tunnelen" til nålespissen kommer nær brystvorten, flytt nålespissen forsiktig opp i mammaryfettputen til nåleøyet kommer under brystvortespissen, kast pinsettene og injiser cellene sakte.
   2. Snu nålen litt og trekk sprøyten sakte tilbake; Bruk en bomullspinne til å trykke nålesåret i 10 -20 s for å sikre at det ikke er væskesanse.
   3. Vær oppmerksom på den fjerde brystvorten for å bekrefte en vellykket injeksjon: en hvit gjennomsiktig flat sfære med brystvorten, da senteret kan observeres (Figur 1).
3. Hold musene bedøvet i et minutt for å unngå å la musene komme seg og bevege seg for raskt, noe som vil føre til at injeksjonssåret åpnes og svulstcellene lekker ut.

Figur 1: Bilder før og etter den ortotopiske injeksjonen ved pattedyrfettputen til kvinnelige Balb/c-mus. Operasjonen ble utført, og bildene ble tatt mens musene var under isofluranbedøvelse. A, før injeksjon, B, etter injeksjon.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
anesthesia machine	Midmark Corporation, Dayton, OH, USA	Matrx VMS	anesthesia
isoflurane	Hebei yipin chemical reagents  company	O21400	anesthesia
1 mL syringe	Becton, Dickinson and  Company	A257	cell injection
hair removal cream	Veet	-	hair removal cream
Carbomer Eye Gel	Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH	-	ophthalmic ointment