דרוזופילה (לא כולל) ניתוח דיסק זחל דמיון: שיטה להתבונן בפיתוח אפיתליה

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: מורימוטו, K. ו Tamori, Y. אינדוקציה ואבחון של גידולים באפיתליה דיסק דמיון Drosophila . ג’יי ויס אקספ. (2017).

כאשר מכתימים דיסקים דמיון Drosophila, לעתים קרובות ניתוח גס מבוצע שבו הדיסקים נחשפים אבל להישאר מחובר לגוף. לאחר מוכתם, הדיסקים של עניין מבודדים רכוב. פרוטוקול הדוגמה מדגים הליך עבור ניתוח דיסק דמיון כנף והרכבה.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך מורימוטו וטמורי, אינדוקציה ואבחון של גידולים באפיתליה דיסק דמיון Drosophila, J. Vis. Exp. (2017). 1. ניתוח הזחלים לאסוף זחלים instar השלישי נודד עם מקל עץ או מלקחיים קהים, גנוטיפ אותם על ידי סמנים פלואורסצנטיים מתאימים(למשל,EGFP) תחת מיקרוס…

Materials

Reagents
Phosphate buffered saline (PBS) Wako 162-19321
TritonX-100 Wako 168-11805
Formaldehyde Wako 064-00406
bovine serum albumin Sigma A7906
normal goat serum Sigma G6767
mounting medium, Vectashield Vector Laboratories H-1000
DAPI Sigma D9542
mouse-anti-Dlg 4F3 Developmental Studies Hybridoma Bank 4F3 anti-discs large, RRID:AB_528203 dilute in PBTG, 1:40
mouse-anti-MMP1 Developmental Studies Hybridoma Bank 3A6B4, RRID:AB_579780 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40
mouse-anti-MMP1 Developmental Studies Hybridoma Bank 3B8D12, RRID:AB_579781 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40
mouse-anti-MMP1 Developmental Studies Hybridoma Bank 5H7B11, RRID:AB_579779 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40
mouse-anti-atubulin Developmental Studies Hybridoma Bank AA4.3, RRID:AB_579793 dilute in PBTG, 1:100
Alexa Fluor 546 Phalloidin Molecular probes A22283 dilute in PBS, 1:40
goat anti-mouse IgG antibody, Alexa Fluor 546 Molecular probes A11030 dilute in PBTG, 1:400
Fly strains
sd-Gal4 Bloomington Drosophila Stock Center #8609 recombined with UAS-EGFP
upd-Gal4 Bloomington Drosophila Stock Center #26796 recombined with UAS-EGFP
UAS-lgl-RNAi Vienna Drosophila RNAi center #51247
UAS-scrib-RNAi Vienna Drosophila RNAi center #105412
UAS-RasV12 Bloomington Drosophila Stock Center #64196
UAS-Yki3SA Bloomington Drosophila Stock Center #28817
hsFLP Bloomington Drosophila Stock Center #6
Act>CD2>GAL4 (flip-out GAL4) Bloomington Drosophila Stock Center #4780 recombined with UAS-EGFP
UAS-EGFP Bloomington Drosophila Stock Center #5428 X chromosome
UAS-EGFP Bloomington Drosophila Stock Center #6658 third chromosome
UAS-Dicer2 Bloomington Drosophila Stock Center #24650 second chromosome
UAS-Dicer2 Bloomington Drosophila Stock Center #24651 third chromosome
vkg-GFP Morin et al. 2001 GFP protein trap

Play Video

Cite This Article
Drosophila Larva Imaginal Disc Dissection: A Method to Observe Developing Epithelia. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20087, doi: (2023).

View Video