Drosophila Larva Imaginal Disk Diseksiyonu: Gelişen Epitelleri Gözlemlemek İçin Bir Yöntem
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Morimoto, K. ve Tamori, Y. Drosophila Imaginal Disc Epithelia’da Tümörlerin İndüksiyonu ve Tanısı. J. Vis. Exp. (2017).
Drosophila imaginal diskleri lekelerken, genellikle disklerin maruz kaldığı ancak vücuda bağlı kaldığı kaba bir diseksiyon gerçekleştirilir. Lekelendikten sonra, ilgi çekici diskler izole edilir ve monte edilir. Örnek protokol, kanat hayali disk diseksiyonu ve montajı için bir yordam gösterir.
Protocol
Bu protokol Morimoto ve Tamori’ den bir alıntıdır, Drosophila Imaginal Disc Epithelia, J. Vis. Exp. (2017)’de Tümörlerin İndüksiyonu ve Teşhisi. 1. Larvaların Diseksiyonu Dolaşan üçüncü instar larvalarını tahta bir çubuk veya künt toparlama ile toplayın, floresan stereoskopik mikroskop altında uygun floresan belirteçlerle(örneğinEGFP) genotipleyin ve PBS (fosfat tamponlu salin) içeren bir diseksiyon kabına yerleşti…
Materials
| Reagents | |||
| Phosphate buffered saline (PBS) | Wako | 162-19321 | |
| TritonX-100 | Wako | 168-11805 | |
| Formaldehyde | Wako | 064-00406 | |
| bovine serum albumin | Sigma | A7906 | |
| normal goat serum | Sigma | G6767 | |
| mounting medium, Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | |
| DAPI | Sigma | D9542 | |
| mouse-anti-Dlg 4F3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 4F3 anti-discs large, RRID:AB_528203 | dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 3A6B4, RRID:AB_579780 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 3B8D12, RRID:AB_579781 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-MMP1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | 5H7B11, RRID:AB_579779 | 3 mixed 1:1:1 and dilute in PBTG, 1:40 |
| mouse-anti-atubulin | Developmental Studies Hybridoma Bank | AA4.3, RRID:AB_579793 | dilute in PBTG, 1:100 |
| Alexa Fluor 546 Phalloidin | Molecular probes | A22283 | dilute in PBS, 1:40 |
| goat anti-mouse IgG antibody, Alexa Fluor 546 | Molecular probes | A11030 | dilute in PBTG, 1:400 |
| Fly strains | |||
| sd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #8609 | recombined with UAS-EGFP |
| upd-Gal4 | Bloomington Drosophila Stock Center | #26796 | recombined with UAS-EGFP |
| UAS-lgl-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #51247 | |
| UAS-scrib-RNAi | Vienna Drosophila RNAi center | #105412 | |
| UAS-RasV12 | Bloomington Drosophila Stock Center | #64196 | |
| UAS-Yki3SA | Bloomington Drosophila Stock Center | #28817 | |
| hsFLP | Bloomington Drosophila Stock Center | #6 | |
| Act>CD2>GAL4 (flip-out GAL4) | Bloomington Drosophila Stock Center | #4780 | recombined with UAS-EGFP |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #5428 | X chromosome |
| UAS-EGFP | Bloomington Drosophila Stock Center | #6658 | third chromosome |
| UAS-Dicer2 | Bloomington Drosophila Stock Center | #24650 | second chromosome |
| UAS-Dicer2 | Bloomington Drosophila Stock Center | #24651 | third chromosome |
| vkg-GFP | Morin et al. 2001 | GFP protein trap |
Cite This Article
Drosophila Larva Imaginal Disc Dissection: A Method to Observe Developing Epithelia. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20087, doi: (2023).