Overview
Denne video beskriver en fodring assay for frugt fluer, hvor farvet mad bruges til at overvåge fodring og den virkning, tilføjede forbindelser kan have på fodring aktivitet. Eksempelprotokollen tester virkningerne af flere hormonforstyrrende kemikalier (EDC).
Protocol
Denne protokol er et uddrag fra Bovier et al.,Metoder til test af endokrine forstyrrelser i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).
1. Fodring Assay
BEMÆRK: Denne analyse anbefales at teste, om tilstedeværelsen af den valgte EDC i mediet kan påvirke fodring af fluer.
- Sæt 15 unge fluer i hætteglas, der indeholder Cornmeal medium (CM) suppleret med forskellige koncentrationer af den valgte EDC og en farve mad. Tillad fluer at fodre på medierne i 1 dag.
BEMÆRK: Brug f.eks. rødt farvestof nr. 40 (1 mg/mL). - Sæt 15 unge fluer i hætteglas, der indeholder CM suppleret med opløsningsmidlet alene og en farvefoder til kontrol. Tillad fluer at fodre på medierne i 1 dag.
- Bedøve individuelt hver gruppe fluer med æter.
- Overfør fluer i hver gruppe til en cylindrisk glasbeholder (etherizer) med en tragt indsat i den åbne ende, invertere hætteglasset over tragten og forsigtigt trykke de to beholdere sammen for at få fluerne til at falde ind i æterizeren.
BEMÆRK: Tragten forhindrer dem i at komme ud af æterizeren. - Knock flyver ned ved forsigtigt at trykke på æterizer på en blød overflade, såsom en musemåtte, og hurtigt erstatte tragten med en æter-gennemblødt bomuld og gaze stik.
- Vent ca. 1 minut, indtil fluerne falder til bunden og holder op med at bevæge sig.
BEMÆRK: Må ikke overstige tiden eller fluerne vil dø.
- Overfør fluer i hver gruppe til en cylindrisk glasbeholder (etherizer) med en tragt indsat i den åbne ende, invertere hætteglasset over tragten og forsigtigt trykke de to beholdere sammen for at få fluerne til at falde ind i æterizeren.
- Sæt immobiliserede fluer under et stereomikroskop og sammenlign abdominal farvelægningen af hver behandlingsgruppe med hensyn til kontrolgruppen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 17α-Ethinylestradiol | Sigma | E4876-1G | |
| Agar for Drosophila medium | BIOSIGMA | 789148 | |
| Bisphenol A | Sigma | 239658-50G | |
| Bisphenol AF | Sigma | 90477-100MG | |
| Cornmeal | CA' BIANCA | ||
| Diethyl ether | Sigma | ||
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789008 | 25 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789009 | 29 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | Kaltek | 187 | 22 mm x 63 mm |
| Ethanol | FLUKA | 2860 | |
| Etherizer | Crafts | cylindrical glass container with a cotton plug | |
| Hand blender Pimmy | Ariete | food processor | |
| Instant Success yeast | ESKA | Powdered yeast | |
| Red dye no. 40 | SIGMA | 16035 | |
| Stereomicroscope with LED lights | Leica | S4E |
