Overview
Questo video descrive un saggio di alimentazione per moscerini della frutta in cui il cibo colorato viene utilizzato per monitorare l'alimentazione e l'effetto aggiunto composti possono avere sull'attività alimentare. L'esempio del protocollo mette alla prova gli effetti di diverse sostanze chimiche che alterano il sistema endocrino (EDC).
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Bovier et al., Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster,J. Vis. Exp.
1. Saggio di alimentazione
NOTA: Questo saggio è raccomandato per testare se la presenza dell'EDC selezionato nel mezzo potrebbe influire sull'alimentazione delle mosche.
- Mettere 15 giovani mosche in fiale contenenti mezzo cornmeale (CM) integrato con diverse concentrazioni dell'EDC selezionato e un alimento colorante. Consentire alle mosche di nutrirsi dei media per 1 giorno.
NOTA: Ad esempio, utilizzare colorante rosso n. 40 (1 mg/mL). - Mettere 15 giovani mosche in fiale contenenti CM integrato con il solo solvente e un alimento da colorare per il controllo. Consentire alle mosche di nutrirsi dei media per 1 giorno.
- Anestetizza individualmente ogni gruppo di mosche con etere.
- Trasferire le mosche di ogni gruppo in un contenitore di vetro cilindrico (etherizer) con un imbuto inserito nell'estremità aperta, invertendo il flaconcino sull'imbuto e toccando delicatamente i due contenitori insieme per far cadere le mosche nell'etherizer.
NOTA: L'imbuto impedirà loro di uscire dall'etere. - Abbatto le mosche toccando delicatamente l'etherizer su una superficie morbida, come un tappetino per mouse, e sostituisci rapidamente l'imbuto con un tappo di cotone e garza imbevuto di etere.
- Attendere circa 1 minuto fino a quando le mosche cadono sul fondo e smettono di muoversi.
NOTA: Non superare il tempo o le mosche moriranno.
- Trasferire le mosche di ogni gruppo in un contenitore di vetro cilindrico (etherizer) con un imbuto inserito nell'estremità aperta, invertendo il flaconcino sull'imbuto e toccando delicatamente i due contenitori insieme per far cadere le mosche nell'etherizer.
- Metti le mosche immobilizzate sotto uno stereo-microscopio e confronta la colorazione addominale di ogni gruppo di trattamento rispetto al gruppo di controllo.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 17α-Ethinylestradiol | Sigma | E4876-1G | |
| Agar for Drosophila medium | BIOSIGMA | 789148 | |
| Bisphenol A | Sigma | 239658-50G | |
| Bisphenol AF | Sigma | 90477-100MG | |
| Cornmeal | CA' BIANCA | ||
| Diethyl ether | Sigma | ||
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789008 | 25 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789009 | 29 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | Kaltek | 187 | 22 mm x 63 mm |
| Ethanol | FLUKA | 2860 | |
| Etherizer | Crafts | cylindrical glass container with a cotton plug | |
| Hand blender Pimmy | Ariete | food processor | |
| Instant Success yeast | ESKA | Powdered yeast | |
| Red dye no. 40 | SIGMA | 16035 | |
| Stereomicroscope with LED lights | Leica | S4E |
