Fütterungstest: Bewertung der Fütterungspräferenzen bei Drosophila melanogaster

Overview

Dieses Video beschreibt einen Fütterungstest für Fruchtfliegen, bei dem farbige Lebensmittel zur Überwachung der Fütterung verwendet werden und welche Auswirkungen hinzugefügte Verbindungen auf die Fütterungsaktivität haben können. Das Beispielprotokoll testet die Auswirkungen mehrerer endokrin störender Chemikalien (EDC).

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Bovier et al.,Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).

1. Fütterung assay

HINWEIS: Dieser Test wird empfohlen, um zu testen, ob das Vorhandensein des ausgewählten EDC im Medium die Fütterung von Fliegen beeinflussen könnte.

1. Legen Sie 15 junge Fliegen in Fläschchen mit Cornmeal Medium (CM) ergänzt mit verschiedenen Konzentrationen des ausgewählten EDC und ein Färbefutter. Lassen Sie Fliegen für 1 Tag von den Medien ernähren.
   HINWEIS: Verwenden Sie beispielsweise den roten Farbstoff Nr. 40 (1 mg/ml).
2. Legen Sie 15 junge Fliegen in Fläschchen mit CM, die nur mit dem Lösungsmittel und einem Färbefutter zur Kontrolle ergänzt werden. Lassen Sie Fliegen für 1 Tag von den Medien ernähren.
3. Anästhetisieren Sie einzeln jede Gruppe von Fliegen mit Äther.
   1. Übertragen Sie fliegen von jeder Gruppe auf einen zylindrischen Glasbehälter (Äther) mit einem Trichter in das offene Ende eingeführt, invertiert die Durchstechflasche über den Trichter und sanft tippen die beiden Behälter zusammen, um die Fliegen in den Äther fallen.
      HINWEIS: Der Trichter verhindert, dass sie aus dem Äther herauskommen.
   2. Knock fliegt nach unten, indem man sanft auf den Äther auf einer weichen Oberfläche, wie z. B. einem Mauspad, tippt, und ersetzt den Trichter schnell durch einen ethergetränkten Baumwoll- und Gaze-Stecker.
   3. Warten Sie ca. 1 min, bis die Fliegen auf den Boden fallen und aufhören sich zu bewegen.
      HINWEIS: Überschreiten Sie nicht die Zeit oder die Fliegen sterben.
4. Setzen Sie immobilisierte Fliegen unter ein Stereomikroskop und vergleichen Sie die Bauchfärbung jeder Behandlungsgruppe in Bezug auf die Kontrollgruppe.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
17α-Ethinylestradiol	Sigma	E4876-1G
Agar for Drosophila medium	BIOSIGMA	789148
Bisphenol A	Sigma	239658-50G
Bisphenol AF	Sigma	90477-100MG
Cornmeal	CA' BIANCA
Diethyl ether	Sigma
Drosophila Vials	BIOSIGMA	789008	25 mm x 95 mm
Drosophila Vials	BIOSIGMA	789009	29 mm x 95 mm
Drosophila Vials	Kaltek	187	22 mm x 63 mm
Ethanol	FLUKA	2860
Etherizer	Crafts		cylindrical glass container with a cotton plug
Hand blender Pimmy	Ariete		food processor
Instant Success yeast	ESKA		Powdered yeast
Red dye no. 40	SIGMA	16035
Stereomicroscope with LED lights	Leica		S4E