Overview
Denne videoen beskriver en fôringsanalyse for fruktfluer der farget mat brukes til å overvåke fôring og effekten tilsatte forbindelser kan ha på fôringsaktiviteten. Eksempelprotokollen tester effekten av flere endokrine forstyrrende kjemikalier (EDC).
Protocol
Denne protokollen er et utdrag fra Bovier et al.,Metoder for å teste endokrine forstyrrelser i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019).
1. Fôring analyse
MERK: Denne analysen anbefales å teste om tilstedeværelsen av den valgte EDC i mediet kan påvirke fôring av fluer.
- Sett 15 unge fluer i hetteglass som inneholder cornmeal medium (CM) supplert med forskjellige konsentrasjoner av den valgte EDC og en fargemat. Tillat fluer å mate på media i 1 dag.
MERK: Bruk for eksempel rødt fargestoff nr. - Sett 15 unge fluer i hetteglass som inneholder CM supplert med løsningsmidlet alene og en fargemat for kontroll. Tillat fluer å mate på media i 1 dag.
- Bedøv individuelt hver gruppe fluer med eter.
- Overfør fluer av hver gruppe til en sylindrisk glassbeholder (eterizer) med en trakt satt inn i den åpne enden, inverter hetteglasset over trakten og trykk forsiktig på de to beholderne sammen for å få fluene til å falle inn i eterizeren.
MERK: Trakten vil hindre dem i å komme seg ut av eterizeren. - Slå fluene ned ved å banke forsiktig på eterizeren på en myk overflate, for eksempel en musematte, og bytt raskt ut trakten med en eter-gjennomvåt bomulls- og gasbindplugg.
- Vent ca 1 min til fluene faller til bunnen og slutt å bevege seg.
MERK: Ikke overskrid tiden eller fluene vil dø.
- Overfør fluer av hver gruppe til en sylindrisk glassbeholder (eterizer) med en trakt satt inn i den åpne enden, inverter hetteglasset over trakten og trykk forsiktig på de to beholderne sammen for å få fluene til å falle inn i eterizeren.
- Sett immobiliserte fluer under et stereomikroskop og sammenlign bukfargen til hver behandlingsgruppe med hensyn til kontrollgruppen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 17α-Ethinylestradiol | Sigma | E4876-1G | |
| Agar for Drosophila medium | BIOSIGMA | 789148 | |
| Bisphenol A | Sigma | 239658-50G | |
| Bisphenol AF | Sigma | 90477-100MG | |
| Cornmeal | CA' BIANCA | ||
| Diethyl ether | Sigma | ||
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789008 | 25 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789009 | 29 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | Kaltek | 187 | 22 mm x 63 mm |
| Ethanol | FLUKA | 2860 | |
| Etherizer | Crafts | cylindrical glass container with a cotton plug | |
| Hand blender Pimmy | Ariete | food processor | |
| Instant Success yeast | ESKA | Powdered yeast | |
| Red dye no. 40 | SIGMA | 16035 | |
| Stereomicroscope with LED lights | Leica | S4E |
