Placage RNAi pour l’alimentation de C. elegans : Une technique pour induire l’expression cible dsRNA dans E. coli

Abstract

Source: Kolundzic, E., et autres. Application de l’ARNi et de l’expression du facteur de transcription induite par le choc thermique pour reprogrammer les cellules germinales aux neurones de C. elegans. J. Vis. Exp. (2018).

Cette vidéo décrit les principes derrière le traitement RNAi dans C. elegans et démontre un protocole pour abattre lin-35 dans une souche de ver transgénique.

Protocol

Ce protocole est extrait de Kolundzic, et coll., Application of RNAi and Heat-shock-induit Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans, J. Vis. Exp. (2018). Préparation des solutions Plaques NGM-Agar (1 L) Ajouter 3 g de NaCl, 2,5 g de peptone (p. ex., Bacto-Peptone) et 20 g …

Representative Results

Figure 1 : Phénotype de Pvul provoqué par RNAi contre lin-53. (En haut) Image DIC des vers de descendance F1 de stade L4/jeune adulte dérivés de la lutte ou des mères traitées par lin-53 RNAi. Barres d’échelle = 20 μm. (Bottom) Les animaux traités avec lin-53 RNAi affichent la vulve saillante(pvul)phénotype (têtes de flèches noires). Le phénotype de pvul …

Materials

Chemicals
Agar-Agar, Kobe I	Roth	5210.1
Bactopeptone	A. Hartenstein GmbH	211 677	Peptone Media
Yeast extract	AppliChem	A1552,0100
Amphotericin B	USBiological	A2220
CaCl2	Merck Biosciences	208290
Cholesterol	Roth	8866.2
Gelatine	Roth	4275.3
IPTG	Sigma	15502-10G
K2PO4	Roth	T875.2
KH2PO4	Roth	3904.2
MgSO4	VWR	25,163,364
Na2HPO4	Roth	P030.1
NaCl	Roth	9265.1
NaClO	Roth	9062.3
NaOH (5 N)	Roth	KK71.1
Tris	Roth	AE15.2
Carbenicillin	Roth	634412
Tetracycline	Roth	2371.2
Incubators
Incubator	Sanyo MIR-5	5534210	for maintenance of worm strains at 15 °C or 25 °C
Microscopes
Stereomicroscope	SMZ745	Nikon
Bacterial strains
Escherichia coli HT115			F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAseIII minus).
Escherichia coli OP50			Uracil auxotroph E. coli strain
Worm strains
BAT28: otIs305 (hsp16.2prom::che-1::3xHA) ntIs1 (gcy-5prom::gfp) V.			derived from OH9846 by 4x times more back crossing with N2
RNAi Clones
lin-53	SourceBioscience	ID I-4D14	Ahringer library 16B07 ChromI, K07A1.12
empty vetor: L4440	Addgene	#1654