C. 예르간 먹이RNAi 도금: 대장균에서 표적 dsRNA 발현을 유도하는 기술

Published: April 30, 2023

Abstract

출처: 콜룬드치치, E., 외. RNAi 및 열 충격 유발 전사 인자 발현의 적용은 C. elegans에서뉴런에 세균 세포를 다시 프로그래밍한다. J. 비스 익스펙. (2018).

이 비디오는 C. elegans에서 RNAi 처리의 뒤에 원리를 설명하고 형질 전환벌레 긴장에 있는 lin-35를 노크하는 프로토콜을 보여줍니다.

Protocol

이 프로토콜은 Kolundzic, 외,RNAi및 열 충격 유도 전사 인자 발현의 응용 프로그램에서 발췌하여 생식세포를 C. 엘레건의뉴런으로 재프로그래밍하기 위해, J. Vis. Exp. (2018).  솔루션 준비 NGM-아가 플레이트 (1 L) NaCl 3g, 펩톤 미디어 2.5g(예: 바토-?…

Representative Results

그림 1: 린-53에 대한 RNAi에 의해 발생 Pvul 표현형. (상단) L4/젊은 성인 단계 F1 자손 웜의 DIC 사진 제어 또는 lin-53 RNAi 치료 어머니에서 파생 된. 스케일 바 = 20 μm. (아래) lin-53 RNAi로 처리된 동물은 돌출된외음부(pvul)표현형(블랙 애로우 헤드)을 표시한다. pvul 표현형은 린-53에 대?…

Materials

Chemicals 
Agar-Agar, Kobe I Roth 5210.1
Bactopeptone  A. Hartenstein GmbH 211 677 Peptone Media 
Yeast extract  AppliChem A1552,0100
Amphotericin B USBiological A2220
CaCl2 Merck Biosciences 208290
Cholesterol Roth 8866.2
Gelatine Roth 4275.3
IPTG Sigma 15502-10G
K2PO4 Roth T875.2
KH2PO4 Roth  3904.2
MgSO4 VWR 25,163,364
Na2HPO4 Roth P030.1
NaCl Roth 9265.1
NaClO Roth 9062.3
NaOH (5 N) Roth  KK71.1
Tris Roth AE15.2
Carbenicillin Roth 634412
Tetracycline Roth 2371.2
Incubators
Incubator  Sanyo MIR-5 5534210 for maintenance of worm strains at 15 °C or 25 °C
Microscopes
Stereomicroscope SMZ745 Nikon
Bacterial strains
Escherichia coli HT115 F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAseIII minus).
Escherichia coli OP50  Uracil auxotroph E. coli strain
Worm strains
BAT28: otIs305 (hsp16.2prom::che-1::3xHA) ntIs1 (gcy-5prom::gfp) V. derived from OH9846 by 4x times more back crossing with N2
RNAi Clones
lin-53 SourceBioscience ID I-4D14 Ahringer library 16B07 ChromI, K07A1.12
empty vetor: L4440 Addgene  #1654

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Cite This Article
RNAi Plating for C. elegans Feeding: A Technique to Induce Target dsRNA Expression in E. coli. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20138, doi: (2023).

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