C.エレガンスの授乳のためのRNAiめっき:大腸菌における標的dsRNA発現を誘導する技術

Abstract

ソース:コルンドジッチ、E.、他.RNAiおよびヒートショック誘発転写因子発現をC.エレガンスのニューロンに再プログラムする応用J. ヴィス・エクス(2018).

このビデオは 、C.エレガンス におけるRNAi治療の原理を説明し、トランスジェニックワーム株で lin-35 をノックダウンするプロトコルを示しています。

Protocol

このプロトコルは、Kolundzic、他、RNAiおよび熱ショック誘発転写因子発現の適用から抜粋され、生殖細胞をC.エレガンスのニューロンに再プログラムする、 J. Vis. Exp.(2018).  ソリューションの準備 NGM-寒天プレート (1 L) NaClの3g、ペプトン?…

Representative Results

図1:リン-53に対するRNAiによって引き起こされるPvul表現型。(トップ)L4/ヤングアダルトステージF1子孫ワームのDIC画像は、コントロールまたはlin-53 RNAi治療された母親に由来する。スケールバー= 20 μm. (下部) lin-53 RNAi で処理された動物は、突出した外陰部(pvul)表現型(黒矢印ヘッド)を表?…

Materials

Chemicals
Agar-Agar, Kobe I	Roth	5210.1
Bactopeptone	A. Hartenstein GmbH	211 677	Peptone Media
Yeast extract	AppliChem	A1552,0100
Amphotericin B	USBiological	A2220
CaCl2	Merck Biosciences	208290
Cholesterol	Roth	8866.2
Gelatine	Roth	4275.3
IPTG	Sigma	15502-10G
K2PO4	Roth	T875.2
KH2PO4	Roth	3904.2
MgSO4	VWR	25,163,364
Na2HPO4	Roth	P030.1
NaCl	Roth	9265.1
NaClO	Roth	9062.3
NaOH (5 N)	Roth	KK71.1
Tris	Roth	AE15.2
Carbenicillin	Roth	634412
Tetracycline	Roth	2371.2
Incubators
Incubator	Sanyo MIR-5	5534210	for maintenance of worm strains at 15 °C or 25 °C
Microscopes
Stereomicroscope	SMZ745	Nikon
Bacterial strains
Escherichia coli HT115			F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAseIII minus).
Escherichia coli OP50			Uracil auxotroph E. coli strain
Worm strains
BAT28: otIs305 (hsp16.2prom::che-1::3xHA) ntIs1 (gcy-5prom::gfp) V.			derived from OH9846 by 4x times more back crossing with N2
RNAi Clones
lin-53	SourceBioscience	ID I-4D14	Ahringer library 16B07 ChromI, K07A1.12
empty vetor: L4440	Addgene	#1654