Drosophila Optogenetica: een methode om neuronale circuits te manipuleren
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: de Vries, S. E., Clandinin, T. Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster. J.Vis. Exp. (2013).
Optogenetica maakt het gebruik van licht mogelijk om neuronen te manipuleren die genetisch zijn ontworpen om specifieke opsines-lichtgevoelige eiwitten uit te drukken waarvan de lichtactivatie een verandering in de toestand van het neuron teweegbrengt. Hier beschrijven we een optogenetische benadering in Drosophila met behulp van de opsin Channelrhodopsin2. Het voorbeeldprotocol bevat een optogenetische testset om het neuronale circuit achter het ontsnappingsgedrag van de vlieg te bestuderen.
Protocol
Dit protocol is een fragment uit de Vries en Clandinin, Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Genereer Channelrhodopsin-vliegen Cross UAS-ChR2 vliegt met de Gal4 driver van uw keuze, we gebruiken G105-Gal4, die wordt uitgedrukt in Foma-1 neuronen in de optische kwab. Om de mogelijkheid van een visuele reactie op de blauwlichtstimulatie te elimineren, bevinden beide vlieglijnen zich op een w+</s…
Representative Results
Figuur 1: Experimentele opstelling met het platform met de verticale houder en de vier koelvloeistof hosing armen met koellichaamken met LED-arrays erop bevestigd. (A) De opstelling onder omgevingsverlichting. (B) De opstelling wanneer de LED’s branden. (C) Een close-up van een Tri-Star LED op het koellichaam. (D) Een close-up van de Tri-Star met de tri-l…
Materials
| Reagent | |||
| All-trans Retinal | Advance Scientific Chemical Inc | R3041 | |
| Equipment | |||
| Heat Sink 9.2 C/W | Luxeonstar | LPD30-30B | 30 mm square X 30 mm high |
| Carclo 18° Tri-Lens | Luxeonstar | 10507 | |
| Blue Rebel LED on Tri-Star Base | Luxeonstar | MR-B0030-20T | 470 nm, 174 lm @ 700 mA. |
| 700 mA BuckPuck DC Driver | Luxeonstar | 3021-D-E-700 | |
| Wiring Harness for BuckPuck Driver | Luxeonstar | 3021-HE | |
| Pre-cut thermal adhesive tape | Luxeonstar | LXT-S-12 | 20 mm Hex Base |
| Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID | McMaster-Carr | 5307K49 | |
| Snap-Loc Coolant Hose Connector | McMaster-Carr | 5307K39 | ¼" NPT Male |
| Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply | BK Precision | 1698 | |
| Exilim camera | Casio | EX-FH20 |
Cite This Article
Drosophila Optogenetics: A Method to Manipulate Neuronal Circuits. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20149, doi: (2023).