Drosophila Optogenetik: Eine Methode zur Manipulation neuronaler Schaltkreise
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: de Vries, S. E., Clandinin, T. Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster. J. Vis. (2013).
Die Optogenetik ermöglicht die Verwendung von Licht, um Neuronen zu manipulieren, die gentechnisch verändert sind, um bestimmte Opsine auszudrücken – lichtempfindliche Proteine, deren Lichtaktivierung eine Veränderung des Zustands des Neurons auslöst. Hier beschreiben wir einen optogenetischen Ansatz in Drosophila mit dem Opsin Channelrhodopsin2. Das Beispielprotokoll verfügt über einen Optogenetik-Assay, der die neuronale Schaltung hinter dem Fluchtverhalten der Fliege untersucht.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus de Vries und Clandinin, Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Generieren Sie Channelrhodopsin Fliegen Cross UAS-ChR2 fliegt mit dem Gal4 Treiber Ihrer Wahl, wir verwenden G105-Gal4, das in Foma-1 Neuronen im optischen Lappen ausgedrückt wird. Um die Möglichkeit einer visuellen Reaktion auf die Blaulichtstimulation zu eliminieren, befinden sich beide Fluglinien i…
Representative Results
Abbildung 1: Experimentelle Einrichtung zeigt die Plattform mit dem vertikalen Halter und den vier Kühlmittel-Hosingarmen, die Kühlkörper mit LED-Arrays halten. (A) Die Einrichtung unter Umgebungsbeleuchtung. (B) Die Einrichtung, wenn die LEDs beleuchtet werden. (C) Eine Nahansicht einer Tri-Star LED auf dem Kühlkörper. (D) Eine Nahaufnahme des Tri-S…
Materials
| Reagent | |||
| All-trans Retinal | Advance Scientific Chemical Inc | R3041 | |
| Equipment | |||
| Heat Sink 9.2 C/W | Luxeonstar | LPD30-30B | 30 mm square X 30 mm high |
| Carclo 18° Tri-Lens | Luxeonstar | 10507 | |
| Blue Rebel LED on Tri-Star Base | Luxeonstar | MR-B0030-20T | 470 nm, 174 lm @ 700 mA. |
| 700 mA BuckPuck DC Driver | Luxeonstar | 3021-D-E-700 | |
| Wiring Harness for BuckPuck Driver | Luxeonstar | 3021-HE | |
| Pre-cut thermal adhesive tape | Luxeonstar | LXT-S-12 | 20 mm Hex Base |
| Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID | McMaster-Carr | 5307K49 | |
| Snap-Loc Coolant Hose Connector | McMaster-Carr | 5307K39 | ¼" NPT Male |
| Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply | BK Precision | 1698 | |
| Exilim camera | Casio | EX-FH20 |
Cite This Article
Drosophila Optogenetics: A Method to Manipulate Neuronal Circuits. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20149, doi: (2023).