Drosophila (olika betydelser) Optogenetik: En metod för att manipulera neuronala kretsar
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: de Vries, S. E., Clandinin, T. Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2013).
Optogenetik gör det möjligt att använda ljus för att manipulera nervceller som är genetiskt konstruerade för att uttrycka specifika opsiner – ljuskänsliga proteiner vars ljusaktivering utlöser en förändring i neurons tillstånd. Här beskriver vi ett optogenetiskt tillvägagångssätt i Drosophila med hjälp av opsin Channelrhodopsin2. Exempelprotokollet har en optogenetikanalys inställd för att studera de neuronala kretsarna bakom flugans flyktbeteende.
Protocol
Detta protokoll är ett utdrag från de Vries och Clandinin, Optogenetic Stimulation of Escape Behavior i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Generera Channelrhodopsin flugor Cross UAS-ChR2 flyger med Gal4-föraren du väljer, vi använder G105-Gal4, som uttrycks i Foma-1-nervceller i optikloben. För att eliminera möjligheten till ett visuellt svar på blåljusstimuleringen är båda fluglinjerna i en w+norpA-bakgrund. …
Representative Results
Figur 1: Experimentell uppsättning som visar plattformen med den vertikala hållaren och de fyra kylvätskespolande armarna som håller kylflänsar med LED-matriser fästa på dem. a)Uppsättningen under omgivande belysning. B)Uppsättningen när lysdioderna tänds. (C) En närbild av en Tri-Star LED på kylflänsen. (D) En närmslutning av Tri-Star med …
Materials
| Reagent | |||
| All-trans Retinal | Advance Scientific Chemical Inc | R3041 | |
| Equipment | |||
| Heat Sink 9.2 C/W | Luxeonstar | LPD30-30B | 30 mm square X 30 mm high |
| Carclo 18° Tri-Lens | Luxeonstar | 10507 | |
| Blue Rebel LED on Tri-Star Base | Luxeonstar | MR-B0030-20T | 470 nm, 174 lm @ 700 mA. |
| 700 mA BuckPuck DC Driver | Luxeonstar | 3021-D-E-700 | |
| Wiring Harness for BuckPuck Driver | Luxeonstar | 3021-HE | |
| Pre-cut thermal adhesive tape | Luxeonstar | LXT-S-12 | 20 mm Hex Base |
| Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID | McMaster-Carr | 5307K49 | |
| Snap-Loc Coolant Hose Connector | McMaster-Carr | 5307K39 | ¼" NPT Male |
| Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply | BK Precision | 1698 | |
| Exilim camera | Casio | EX-FH20 |
Cite This Article
Drosophila Optogenetics: A Method to Manipulate Neuronal Circuits. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20149, doi: (2023).