C. elegans Seguimiento del movimiento: un método para evaluar la locomoción en gusanos

Abstract

Fuente: Davies, A. G. et al. Un ensayo para medir los efectos del etanol en la velocidad de locomoción de Caenorhabditis elegans. J. Vis. (2015). 

Este video describe el uso de software de video y seguimiento para grabar el movimiento de gusanos en una arena.  El protocolo de ejemplo mide el efecto de la exposición al etanol en la locomoción del gusano.

Protocol

El siguiente protocolo es un extracto de Davies et al, An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans, J. Vis. (2015). Pasos a realizar el día antes del ensayo Elija gusanos de etapa L4 en placas frescas de medio de crecimiento de nematodos (NGM) sembradas con un césped d…

Materials

C. elegans strains	Caenorhabditis Genetics Center
60 x 15 mm Petri plates, triple vented	Greiner Bio-One	628161	Other plate brands will suffice.
NGM agar	Various		NaCl (3 g/L), agar (17 g/L), peptone (2.5 g/L), 1 ml cholesterol (5 mg/ml in ethanol), 1 ml (1 M) MgSO4, 1 ml (1 M) CaCl2, 25 ml (1 M) KPO4, pH=6, 975 ml H2O
Forceps	Various		e.g., Fisher Scientific #10300
37 °C Incubator	Various		For drying agar
Copper rings	Plumbmaster	STK#35583 (48 cap thread gasket)	1.6 cm inner diameter, 1.8 cm outer diameter copper rings
100% ethanol	Various
Parafilm M	Bemis	PM996
CCD camera	QImaging	RET-4000R-F-M-12	This camera has a large field of view.
Stereomicroscope with C-mount and 0.5X objective	Leica	MZ6	Discontinued model, M60 is current equivalent.
Light source	Schott	A08923	3”x3”  backlight for even illumination across the field of view
Imaging and tracking software	Media Cybernetics	ImagePro-Plus v6.0-6.3	Newer versions of the software have tracking functions.