钙成像：一种在活C.电子人中可视化神经活动的方法

Overview

该视频介绍了钙成像背后的概念，并包括一个用于模制糖井中含有蠕虫的延时成像示例协议。

Protocol

本协议摘自图雷克等人，阿加罗斯微查伯斯长期钙成像的卡诺哈布迪蒂斯埃莱甘斯，J.Vis.Exp。(2015). 

1. 钙成像

1. 使用转基因菌株表达基因编码的钙传感器，如 HBR16（goeIs5 =pnmr-1：：SL1-GCaMP3.35-SL2：：unc-54-3'UTR，非 c-119 （+））。
2. 使用配备用于广域癫痫的复合显微镜。将 EMCCD 摄像机的 TTL 输出连接到 LED 的 TTL 输入，以便每次摄像机记录帧时，样本都会被照亮。使用约5毫秒的曝光时间。在 50 - 300 范围内使用 EM 增益。
3. 指定一个运行 24 小时的突发电影，每 15 - 30 分钟用 DIC 先对每 15 - 30 分钟对一次蠕虫进行成像，然后用 GFP 荧光记录 GCaMP 20 秒，然后拍摄 mKate2 信号的最终图像，以控制表达水平。每次爆裂时使用 2/秒的帧速率。
4. 用于视觉数据检查，使用假彩色地图提高荧光强度小变化的可见性。将荧光数据绘制为ΔF/F，F 为荧光的平均基线值。在文献中可以找到钙数据分析的详细描述。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
LED system	CoolLED	pE-2
Compound microscope	Nikon	TiE
EMCCD camera	Andor	iXon 897	now sold as iXon Ultra 897
Z-stage for the microscope	Prior	Nano Scan Z
X-Y stage for the microscope	Prior	Proscan III
Red light filter	Chroma	ET660/50m
35 mm Petri dish	Falcon	Falcon Disposable Petri Dishes, Sterile, Corning