Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Encyclopedia of Experiments

Kalciumavbildning: En metod för att visualisera neural aktivitet i Live C. elegans

Overview

Denna video introducerar begreppen bakom kalciumavbildning och innehåller ett exempelprotokoll för timelapse-avbildning av maskar som finns i gjutna agarosabrunnar.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Turek et al, Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2015).

1. Kalciumavbildning

  1. Använd transgena stammar som uttrycker genetiskt kodade kalciumsensorer som HBR16(goeIs5[pnmr-1::SL1-GCaMP3.35-SL2::unc-54-3'UTR, unc-119(+)]).
  2. Använd ett sammansatt mikroskop som är utrustat för epifluorescens med bred fält. Anslut TTL-utgången för EMCCD-kameran till LYSDIODENS TTL-ingång, så att varje gång kameran spelar in en bildruta kommer provet att belysas. Använd en exponeringstid på ca 5 msec. Använd EM-förstärkning i intervallet 50 -300.
  3. Ange en burst-film som körs i 24 timmar med varje mask som avbildas var 15: e till 30:e minut först i 20 sekunder med DIC, sedan i 20 sekunder med en GFP-fluorescens för att spela in GCaMP och ta sedan en slutlig bild av mKate2-signalen tas för att styra för uttrycksnivåer. Använd en bildhastighet på 2/sek under varje burst.
  4. För visuell datainspektion, använd en falsk färg karta för att förbättra synligheten för små förändringar i fluorescens intensitet. Rita fluorescerande data som ΔF/F, där F är fluorescensens genomsnittliga baslinjevärde. En detaljerad beskrivning av kalcium data analys finns i litteraturen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LED system CoolLED pE-2
Compound microscope Nikon TiE
EMCCD camera Andor iXon 897 now sold as iXon Ultra 897
Z-stage for the microscope Prior Nano Scan Z
X-Y stage for the microscope Prior Proscan III
Red light filter Chroma ET660/50m
35 mm Petri dish Falcon Falcon Disposable Petri Dishes, Sterile, Corning

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

Tomt värde ärende
Kalciumavbildning: En metod för att visualisera neural aktivitet i Live <em>C. elegans</em>
Play Video
DOWNLOAD MATERIALS LIST
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter