الهروب استجابة المقايسة: طريقة لدراسة استجابة يرقة حمار وحشي للمس المحفزات

Overview

يصف هذا الفيديو اختبار الاستجابة الذي يثير اللمس ، والذي يقيس استجابة يرقة الحمار الوحشي للمس المحفزات.

Protocol

1. المقايسة استجابة التي أثارتها اللمس

1. إعداد 2 دبف الأجنة لمسة أثار استجابة المقايسة
   1. تأكد من أن الوقت من اليوم الذي يتم فيه إجراء الاختبار متسق بين التجارب لأن النشاط يمكن أن يختلف بشكل كبير على مدار اليوم.
      ملاحظة: يجب أن يتم إجراء التجربة أعمى وترتيب اختبار عشوائية لتقليل القطع الأثرية التجريبية.
   2. تعيين سلالات الأسماك عدد، وهو أمر غير معروف للفرد تنفيذ التجربة. بعد ذلك ، باستخدام الأدوات المتاحة مجانا على الانترنت إنشاء قائمة عشوائية تملي ترتيب الاختبار.
   3. قبل ساعة واحدة على الأقل من الاختبار ، تقوم بإزالة الكورونات من الأجنة عن طريق تمزيق ثقب في المشيمة وسحب المشيمة بلطف باستخدام زوج من الملاقط الدقيقة. إزالة أي حطام من طبق بيتري قبل العودة إلى حاضنة 28 درجة مئوية.
2. إجراء اختبار الاستجابة الذي تم استحضاره باللمس
   1. حرارة المرحلة إلى 28 درجة مئوية على الأقل 15 دقيقة قبل بدء الاختبار.
      ملاحظة:يتم التحكم في درجة الحرارة هذه المرحلة وستبقى عند 28 درجة مئوية لمدة الاختبار. درجة الحرارة سوف تؤثر على النشاط، وبالتالي من المهم للحفاظ على درجة حرارة ثابتة. إذا لم تكن مرحلة ساخنة متوفرة ، فيجب مراقبة درجة حرارة الماء وينبغي إجراء جميع التجارب في نفس درجة الحرارة.
   2. وضع طبق بتري مليئة المتوسطة الجنين (5 mM NaCl, 0.17m KCl, 0.33 mM CaCl₂, 0.33 mM MgSO₄ في الماء) على مرحلة مضيئة وجبل الكاميرا عالية السرعة على طبق بيتري.
   3. قم بتشغيل برنامج تسجيل كاميرا الفيديو (مثل Stream Pix 5، الموضح هنا) وتحت علامة التبويب "مساحة العمل" حدد 1000 إطار في الثانية (1000 إطارا في الثانية) كسرعة التقاط لضمان تسجيل حركة السباحة السريعة للأسماك.
   4. العمل مع جنين واحد في وقت واحد، ووضع الجنين في منتصف طبق بتري مع حمار وحشي مرئية بوضوح في مجال الرؤية.
      ملاحظة:إذا كان الجنين يسبح بعيدا قبل بدء التجربة استبداله بأخرى، كما استعادة وتحديد المواقع من الجنين قد يؤدي إلى أن تصبح غير حساسة للتحفيز والاستجابات انفجار المتكررة قد تعزز ضعف العضلات في بعض نماذج المرض.
   5. بدء التسجيل عن طريق النقر على زر "تسجيل" وتقديم التحفيز mechanosensory للجنين عن طريق لمسه بلطف مع إبرة حادة على الجزء العلوي من الرأس.
   6. أوقف التسجيل بعد أن سبح الجنين خارج مجال الرؤية أو عاد للراحة.
      ملاحظة:يبلغ التسارع ذروته خلال أول 0.2 ثانية من استجابة الهروب الاندفاعي بعد التحفيز الميكانيكي. ولذلك، تأكد من أن على الأقل خلال أول 0.2 ثانية من الاستجابة الهروب تسجيل الأسماك في مجال الرؤية. باستخدام برنامج Stream Pix 5 ، سيتم حفظ البيانات تلقائيا كملف فيديو .avi. كما يمكن استخدام برامج التقاط الفيديو البديلة مثل Free Video Capture أو Softonic ، وكلاهما متاح مجانا للتنزيل.
   7. أعد الجنين إلى طبق بتري جديد واختر جنينا آخر لاختباره. إجراء اختبار على ما لا يقل عن 15 سمكة.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products	PT S90001
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
High Speed Camera	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2