Побег Ответ Анализ: Метод для изучения реакции Зебрафиш Ларва коснуться стимулов

Overview

Это видео описывает сенсорный ответ анализ, который измеряет реакцию личинки зебры коснуться стимулов.

Protocol

1. Сенсорный анализ ответов

1. Подготовка 2 dpf эмбрионов для сенсорного вызываемого анализа ответов
   1. Убедитесь, что время суток, в которое проводится тест, согласуется между экспериментами, поскольку активность может сильно различаться в течение дня.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эксперимент должен быть выполнен ослеплен и порядок тестирования рандомизированных, чтобы свести к минимуму экспериментальные артефакты.
   2. Назначить рыбе штаммы числа, которое неизвестно человеку, проводя эксперименту. После этого, используя свободно доступные онлайн-инструменты генерировать случайный список, который диктует порядок тестирования.
   3. По крайней мере за час до тестирования, дехорионат эмбрионов, разрывая отверстие в хорионе и осторожно потянув хорион друг от друга с помощью пары тонких пинцетов. Удалите мусор из чашки Петри, прежде чем вернуться в инкубатор 28 градусов по Цельсию.
2. Выполнение сенсорного анализа ответов
   1. Нагрейте стадию до 28 градусов по Цельсию по крайней мере за 15 минут до начала тестирования.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Этот этап контролируется температурой и будет оставаться на уровне 28 градусов по Цельсию в течение всего срока тестирования. Температура будет влиять на активность, и поэтому важно поддерживать постоянную температуру. Если нагретая стадия недоступна, то следует контролировать температуру воды и проводить все эксперименты при одинаковой температуре.
   2. Поместите чашку Петри, наполненную эмбриональной средой (5 мММ NaCl, 0.17mM KCl, 0.33 mM CaCl₂, 0.33 mM MgSO_{4 в} воде) на освещенную сцену и смонтировать высокоскоростную камеру над чашкой Петри.
   3. Запустите программное обеспечение для записи видеокамер (например, Stream Pix 5, описанный здесь) и под вкладкой "рабочее пространство" выберите 1000 кадров в секунду (1000 кадров в секунду) в качестве скорости захвата, чтобы гарантировать, что быстрое действие плавания рыбы записывается.
   4. Работая с одним эмбрионом за один раз, поместите эмбрион в середине чашки Петри с зебры хорошо видны в поле зрения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если эмбрион уплывает до начала эксперимента заменить его на другой, как восстановление и позиционирование эмбриона может привести к его становится десенсибилизированных к стимулу и повторный всплеск ответы могут способствовать мышечной слабости в некоторых моделях болезни.
   5. Начните запись, нажав на кнопку "запись" и, доставить механосенсальный стимул для эмбриона, касаясь его мягко тупой иглой на верхней части головы.
   6. Остановите запись после того, как эмбрион выплыл из поля зрения или вернулся к отдыху.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Пики ускорения в течение первых 0,2 сек реакции побега взрыва после механического стимула. Таким образом, убедитесь, что по крайней мере в течение первых 0,2 сек реакции побега записи рыбы находится в поле зрения. Используя программное обеспечение Stream Pix 5, данные будут автоматически сохранены в качестве .avi видео файла. Можно также использовать альтернативное программное обеспечение для захвата видео, такое как Free Video Capture или Softonic, оба из которых находятся в свободном доступе для скачивания.
   7. Верните эмбрион в новую чашку Петри и выберите другой эмбрион для тестирования. Выполните тестирование как минимум на 15 рыб.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
90 mm Petri Dishes	Pacific Laboratory Products	PT S90001
Tweezers, style 8	ProSciTech	T04-821
Incubator	Thermoline Scientific	TEI-43L
High Speed Camera	Baumer	HXC20
StreamPix5	NorPix		Step 1.2.3
Temperature Control Unit	Viewpoint
http://www.randomization.com	N/A		Steps 1.1.2