成年鼠神经干细胞的分离和扩大使用神经干含量
Summary
这个视频协议演示，从成年小鼠脑室周围地区产生和扩大神经干细胞的神经球的含量测定方法，并提供技术见解，以确保可以实现重复性的神经球文化。
Abstract
分离和扩展的假定从成年鼠大脑中的神经干细胞（NSCs的）是在1992年首次描述了采用化学定义的无血清培养系统，被称为神经干法（NSA）的雷诺和Weiss。在这个实验中，多数分化的细胞类型文化的几天内死亡，但人口少的生长因子的反应前体细胞进行增殖活跃在表皮生长因子（EGF）和/碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的存在。这些细胞的未分化细胞，称为神经球，这反过来又可以传代培养的神经干细胞池扩大形成的殖民地。此外，细胞可以诱导分化，产生中枢神经系统，即神经元，星形胶质细胞和少突胶质细胞的三个主要类型的细胞。这个实验提供了一个宝贵的工具，提供一个一致的，可再生能源的未分化的中枢神经系统前体， 可用于在体外研究中，也为治疗目的。
本视频演示了NSA的产生和扩大，从成年小鼠脑室周围区域的神经干细胞的方法，并提供技术见解，以确保可以实现重复性的神经球文化。该过程包括收获从成年小鼠，脑室周围地区的微观解剖，组织编制和文化在NSA大脑。收获的组织是第一个使用在NSC培养基胰蛋白酶- EDTA和机械分离，实现了单细胞悬液，最后镀在NSA化学消化。经过7-10天文化，产生的初级神经球传代培养的准备，以达到未来的实验所需的细胞量。
Protocol
Discussion
神经球的检测 2不仅获得了隔离和中枢神经系统 4-5的神经干细胞研究，但也是公认的从众多的组织干细胞 ，如乳房 6和心脏7，其他类型的隔离研究界的广泛关注和脑，乳腺癌和结肠癌肿瘤干细胞8-9表明，这种文化系统可应用于体细胞和肿瘤的整个身体的前体细胞群的鉴定。这种方法的一些优点，包括它的简单性，重复性和无限期数量从一小块组织，甚至?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是从Overstreet基金会的资金支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NeuroCult NSC Basal Medium | Medium | Stem Cell Technologies | 05700 | |
| NeuroCult NSC Proliferation Supplements | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05701 | |
| %0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
| Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
| Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
| T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
| T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
| EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
| Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| *MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
| *HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
| *Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
| 15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
| 50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
| Fine curved forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11251‐35 | |
| Small fine forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11272‐30 | |
| Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050‐10 | |
| b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
| Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
*To make HEM, mix 1×10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.
References
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